ما هو النوكلياز الداخلي؟
1775070#0
نوكلياز داخلي مؤلف هي عبارة عن مجموعة من انزيمات النوكلياز المشفرة.تكون إما قائمة بذاتها أو مرتبطة بالجينات ضمن الإنترونات .
وظيفة هذه الانزيمات هي قطع الحمض النووي البكتيري في نقطة محددة حيث يدخل بجوارها الجين الغريب إلى الشيفرة الجينية لدى البكتيريا. تتواجد هذه الإنزيمات كذلك في أنواع البكتيريا "الهيلوفيلية" (حرفيا: المحبة للملح) من مملكة الأرخيا، القادرة على العيش في نسبة ملوحة عالية جدا، حتى في مياه "البحر الميت". يركز غوفنا وغوغارتين على هذه البكتيريا بهدف تحليل المنظومة الجزيئية لنقل الجينات العرضي. (وبالصدفة، فإن تحليل المبنى الجزيئي للريبوزوم، ، قد تم إجراؤه.
نوكلياز داخلي مؤلف
3964831#12
على المستوى الجزيئي، يعمل الإجبار الجيني عن طريق الأنوكلياز الداخلي على قطع الصبغيات وإجبار الخلية على إصلاح الأضرار الناجمة عن نسخ تسلسل الجينات الإجبارية على الشريط المتضرر الذي ينتج نسختين متطابقتين على شريطي الصبغي. هذه التقنية هي مشتقة من تقنيات تعديل الجينوم، حيث تستخدم حقيقة أن الفواصل المزدوجة للشريطين يتم إصلاحها في كثير من الأحيان عن طريق التأشيب المتماثل إذا كان الجين متواجدا على كلا الشريطين. في حالات نادرة يتم الإصلاح بواسطة نهاية الروابك الغير متماثلة، في هذه الحالة بالذات الإجبار لا يعمل.
لتحقيق هذا الهدف، يجب أن تتكون وحدات جين النوكلياز الداخلي من عنصرين مترابطين:
سواء نوكلياز داخلي مؤلف أو نوكلياز داخلي موجهة بواسطة الحمض النووي الريبي (كمثال : Cas9 أو Cpf1). للحصول على وظيفة الانتشار التلقائي للجين، يجب أن يحتوي تسلسل الإصلاح هذا على تسلسل نوكلياز داخلي على الأقل.
يتسبل استهداف الجينات المعبر عنها، بإجبارها على الإنطفاء (الإسكات الجيني). بذلك يمكن إدخال تسلسلات إضافية في الجين الذي تم إجباره لترميز وظائف جديدة.
محرك الجينات
1774607#4
وقد تم تحديد نشاط النوكلياز الداخلية مبدئيًا من خلال التأثير على ثنائي الحمض الريبي النووي المنزوع الأكسجين الذي يتمتع بطفافة 5' أحادية الطاق على إحدى الطاقين (الذي يُشار إليه اصطلاحًا باسم "سديلة 5'"، وبالتالي تم اشتقاق اسم النوكلياز الداخلية السديلة. تعمل النوكلياز الداخلية السديلة على تحفيز الانقسام الحلمهي لرابط الإسترات الفوسفورية عند ملتقى الحمض الريبي النووي المنزوع الأكسجين أحادي الطاق وثنائي الطاق. كذلك تعمل النوكلياز الداخلية السديلة كنوكلياز خارجية 5'-3' على نهاية 5' الخاص بطاق السديلة وعلى ركائز الحمض النووي الريبي المنزوع الأكسجين ركيزة (الكيمياء الحيوية)| ’المحزز‘.
نوكلياز داخلي
1774607#0
نوكلياز داخلي هي مجموعة من الانزيمات التي تلتصق مع اجزاءمن سلسلة الفسفودیستر ضمن سلسلة النوكليوتيد . هناك عدد قليل من الطبقات الكبيرة من النوكلياز الداخلية تلتصق فقط في تسلسل النوكليوتيدات المحددة (مثل نوكليازات الاقتطاع الداخلية التي تعتبر حيوية في مجال التكنولوجيا الحيوية). كما هناك نوكليازات إنزيمات الاقتطاع ، وعادة ما تسمى إنزيمات الاقتطاع . نوكلياز داخلي يتواجد في البكتيريا والعتائق(archea) أن يتعرف على تسلسل الحمض النووي محددة. ويطلق على تسلسل النوكليوتيدات المعترف بها للانشقاق عن طريق إنزيمات الاقتطاع موقع الاقتطاع وغالبا ما تستخدم هذه الإنزيمات في الهندسة الوراثية لجعل الحمض النووي المؤتلف لتقديم داخل البكتيرية، والنبات، أو الخلايا الحيوانية، وكذلك في البيولوجيا التركيبية .
نوكلياز داخلي
1774524#0
نوكلياز او نيوكلييز هو انزيم يحفز على تحلل حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين بواسطة فك الروابط الموجودة بين النيوكليوتيدات المتجاورة.
يقوم نوكلياز على الشق والسندات سلسلة فسفودیستر( phosphodiester) بين مفارز النوكليوتيدات المتجاورة في الأحماض النووية . المنشورات القديمة قد تستخدم مصطلحات مثل "بولي نوكليوتيداز" . وتنقسم عادة إلى مزيد من نوكلياز داخلية (endonucleases)و نوكلياز خارجية(exonucleases) ، وبالرغم من أن بعض الإنزيمات قد تقع في كلتا الفئتين.فان النوكلياز المعروفة هي ديوكسي ريبونيوكلياز وريبونوكلياز .
نوكلياز
1774607#3
النوكلياز الداخلية السديلة (FENs، تُعرف أيضًا باسم 5' nucleases في المراجع القديمة) Flap endonuclease هي فئة من الإنزيمات الحالّة النووية التي تعمل الاتجاهية (البيولوجيا الجزيئية) 5'-3' نوكلياز خارجية ونوكلياز داخلية محددة البنية على بنى الحمض الريبي النووي المنزوع الأكسجين المخصصة التي تحدث أثناء العمليات البيولوجية لتكرار الحمض الريبي النووي المنزوع الأكسجين وإصلاح الحمض الريبي النووي المنزوع الأكسجين وإعادة تركيب الحمض الريبي النووي المنزوع الأكسجين. وتم تحديد النوكلياز الداخلية السديلة في حقيقيات النوى وبدائيات النوى والعتائق وبعض الفيروسات. يمكن أن يكون لدى الكائنات الحية أكثر من نديد نوكلياز داخلية سديلة واحد، وهذه الزيادة قد تعطي مؤشرًا على أهمية هذه الإنزيمات. في بدائيات النوى، يوجد إنزيم النوكلياز الداخلية السديلة كنطاق N-نهائي خاص لدنا بوليميريز I، إلا أن بعض بدائيات النوى تظهر لترميز نديد ثانٍ.
نوكلياز داخلي
9899#55
النوكليازات هي إنزيمات تقوم بقص سلاسل الدنا بتحفيز حلمـأة روابط الفوسفات ثنائية الأستر. تسمى النولكيازات التي تقوم بحلمأة النوكليوتيدات عند نهايات سلسلتي الدنا نوكليازات خارجية وتسمى التي تقوم بالقص داخل السلاسل نوكليازات داخلية، أكثر إنزيمات النوكلياز استخدما في علم الأحياء الجزيئي هي إنزيمات التقييد الداخلية التي تقطع الدنا في تسلسلات محددة، على سبيل المثال: إنزيم EcoRV الموضح في الصورة يمينا يتعرف على على التسلسل السداسي codice_2 ويقوم بالقطع على الخط الأفقي. في الطبيعة تحمي هذه البروتينات البكتيريا من عدوى العاثيات وذلك بهضم دنا العاثية لدى دخوله خلية البكتيريا، متصرفة كجزء من نظام منع التغييرات، وفي التكنولوجيا تستخدم هذه الإنزيمات المختصة بتسلسلات معية في التنسيل الجزيئي والبصمة الوراثية.
حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين
1711890#0
الهيكل الداخلي (من اليونانية ἔνδον, éndon = "بالداخل"، "داخلي" + σκελετός, skeletos = "هيكل") هو الهيكل الداخلي الداعم للحيوان ، ويتكون من أنسجة ممعدنة. وينمو الهيكل الداخلي بداخل الجلد أو في أنسجة الجسم الغائرة. وتعتبر الفقاريات أساسًا هيكلاً داخليًا مكونًا من نوعين من الأنسجة (العظم والغضاريف). ويتكون الهيكل الداخلي، أثناء النمو الجنيني المبكر، من الحَبْل الظَّهْري والغضاريف. ثم يُستبدل الحبل الظهري في معظم الفقاريات بالعمود الفقري والغضروف بالعظم عند البلوغ. وقد وُجدت في ثلاث شعب وطائفة فرعية من الحيوانات، هياكل داخلية معقدة: الحبليات والشوكيات والإسفنجيات والغمديات. وقد تكون وظيفة الهيكل الداخلي هي التدعيم فقط (كما في الإسفنجيات)، ولكنه غالبًا ما يكون كملحق للعضلات وميكانيكية لنقل القوى العضلية. وينتج الهيكل الداخلي من نسيج أديمي متوسط . ويوجد مثل هذا الهيكل العظمي في الشوكيات والحبليات. ويتكون الهيكل العظمي في الإسفنجيات من شُوَيْكَات كلسية أو سيليكونية مجهرية أو شبكة سبونجيات. ولا تمتلك الغمديات هيكلاً داخليًا حقيقيًا بالمعنى التطوري، فقد تطور الهيكل الخارجي للرخويات إلى أنواع عديدة من الهيكل الداخلي، ويعتبر "عظم الحبَّار" للحبَّار أكثر الأمثلة المعروفة في هذا الإطار. ولكنها تتميز بنسيج غضروفي في جسمها، في الرأس بالأخص، حتى وإن لم يكن ممعدنًا، حيث يشكل جمجمة بدائية. إن الهيكل الداخلي يعطي الشكل، ويعمل كدعامة، ويقدم الحماية للجسم، ويوفر وسيلة للتحرك.
هيكل داخلي
1774607#1
هناك ثلاث فئات من نوكليازات الاقتطاع الداخلية التي تسهم نسبيا إلى انشقاقات متوالية محددة. أنواع الأول والثالث هي مجموعة متعدد الوحيدات الكبيرة (multisubunit )و التي تشمل كلا من نوكلياز داخلية و ناقل المثيل . النوع الأول يستطيع أن يلتصق في مواقع عشوائية من حوالي 1000 زوج من القواعد أو أكثر من تسلسل الاعتراف(recognition sequence) و يتطلب أدينوسين ثلاثي الفوسفات(ATP ) كمصدر للطاقة. والنوع الثاني يتصرف بشكل مختلف قليلا وعزل لأول مرة من قبل هاميلتون سميث في عام 1970. ويعتبر أبسط من الإصدارات النوكلياز الداخلية ويتطلب أي أدينوسين ثلاثي الفوسفات(ATP ) في عمليات تدهورها. بعض الأمثلة على النوع الثاني من نوكليازات الاقتطاع الداخلية تشمل BamHI، EcoRI، EcoRV، وHaelll. والنوع الثالث، ومع ذلك، يشق الحمض النووي في حوالي 25 زوجا من قاعدة تسلسل الاعتراف ويتطلب أيضاأدينوسين ثلاثي الفوسفات(ATP ) في هذه العملية.
نوكلياز داخلي
1653375#0
إنزيم الاقتطاع أو نوكليازات الاقتطاع الداخلية هو نوع خاص من الجزيئات الضخمة البيولوجية يعمل كجزء من "الجهاز المناعي" لـ البكتيريا. وهناك نوعٌ مُميز من إنزيمات الاقتطاع وهو "النوكلِيازات الداخلية الموجهة"، ويوجد هذا النوع في النطاقات الثلاثة المتعلقة بتصنيف الكائنات الحية، على الرغم من اختلاف وظائف كل نطاقٍ عن الآخر.
قائمة مواضع قطع إنزيم الاقتطاع