text:
Từ khóa hot:
Bài hát
ca sĩ
, Thể loại .Tải download bài hát
MP3
miễn phí tại nhac.vui.vn
Đăng nhập
/
Đăng ký
Thể loại
Nhạc Việt Nam
Nhạc Trẻ
Nhạc Hot Nhất
Nhạc Hải Ngoại
Nhạc Quê Hương
Nhạc Trữ Tình
Dance Việt
Rap Việt
Nhạc Đỏ
Nhạc Trịnh
Nhạc Vàng
Nhạc Thiếu Nhi
Cải Lương
Rock Việt
Quan Họ Bắc Ninh
Nhạc Nước Ngoài
Nhạc Hot Nhất
Nhạc Hàn Quốc
Dance Hot
Nhạc Âu Mỹ
Nhạc Hoa
Rock
Nhạc Nhật Bản
Nhạc Đồng Quê
Hip-Hop/Rap
Nhạc Spa & Massage
Clip tổng hợp
Clip Hài
Clip Games
Nhạc Trong Phim
Phim Nước Ngoài
Phim Việt Nam
Thể Loại Khác
Nhạc Không Lời
Nhạc Game
Beats / Karaoke
Nhạc Giáng Sinh
Nhạc Bà Bầu
Bảng xếp hạng
Việt Nam
Bài hát
Video
Album
Âu Mỹ
Bài hát
Video
Album
Hàn Quốc
Bài hát
Video
Album
Video Clip
Việt Nam
Âu Mỹ
Hàn Quốc
Giải Trí
Sao Vui
Nhạc tuyển chọn
Hôm nay nghe gì?
Gửi người phụ nữ tôi yêu
Ngày cưới
Khúc ca tặng cha
Bài hát tặng mẹ
Các ca khúc nhạc Hàn bất hủ
Nhạc Phim Hàn Quốc
Old Songs Collection
Love Songs Collection
Wedding Songs Collection
Nhạc Hoa bất hủ
Nhạc Nga trong lòng người Việt
Nhạc Dance hay nhất
Các ca khúc Quốc Tế bất hủ
Ca sỹ cần đăng bài hát hoặc hợp tác, liên hệ Mr.Hiếu – 0979905003
Nhac.vui.vn - Nghe & Tải Nhạc Chất Lượng Cao
Bài hát không tồn tại
Video clip hot nhất
Trẻ trâu quẩy nát đám cưới nhà người ta
Heart Attack
Get High
Tuổi Thanh Xuân
Mèo biểu diễn Thái Cực Quyền
Phép Màu Cuộc Sống
Bài học về tình thương thời công nghệ
Phía Sau Anh
Mashup Chưa Bao Giờ Rời Xa (Acoustic Cover)
Thời Gian
Bài hát cùng ca sĩ
> Tất cả
Sắp xếp bài hát theo:
Thời gian
Lượt nghe
Khi Nào Em Buồn
Tìm Đâu
Video cùng ca sĩ
> Tất cả
My Type
Đang cập nhật
Top 5 Album Phim Nước Ngoài
Bên Nhau Trọn Đời (Movie OST)
Various Artists
Beautiful (EXO Next Door OST)
Baekhyun (EXO)
Hoạt Sắc Sinh Hương OST
Various Artists
Thiên Kim Nữ Tặc OST
Various Artists
Pinocchio OST Part.8
Kim Bo Kyung
Top 10 Bài Hát Phim Nước Ngoài
I Believe (Cô Nàng Ngổ Ngáo OST)
Shin Seung Hun
My Heart Will Go On (Titanic)
The Movie Masters
See You Again
Mychael Danna
So In Love (김정운)
Nhạc Phim Hàn Quốc
I Swear
The Minions
Tha Thứ (Nhạc Phim Thiên Long Bát...
Vương Phi / Faye Wong
Xin Shang Hai Tan (Tân Bến Thượng...
Nhiều Ca Sĩ
BK Love - MC Sniper
Nhạc Phim Hàn Quốc
Họa Tình
Diêu Bối Na
Fate (Full House OST)
WHY
Top 5 MV Việt Nam
Get High
Lưu Hương Giang
Phép Màu Cuộc Sống
Nguyễn Hồng Ân
Khi Nào Em Biết Anh Yêu Em
Khánh Trần
Có Hẹn Cùng Hạnh Phúc (Phim ngắn)
TIM (Cát Vũ)
,
Trương Quỳnh Anh
Anh Đã Từng Yêu Em
Dương Nhất Linh
Vương Quốc Âm Nhạc trên Fb
Thẻ nội dung
Nhac tre hay
,
Ký Ức Đượm Buồn
,
Nghe nhac Mp3
,
Son Tung MTP
,
Su That Sau Mot Loi Hua
,
Anh Nho Em Nguoi Yeu Cu
,
Chot Buon
,
Loi Hua Chi La Loi Hua
,
Nam Lay Tay Anh
,
Em La Cua Anh
,
Mò Kim Đáy Bể
,
Em Quay Về Đi
,
Xin Người Nhớ Tên
Album Hot tháng 9
Video hot
Playlist nổi bật
Nhạc trẻ
Nhạc quốc tế
Nhạc dance
Nhac Viet nam
,
Mp3
,
Nhac dance
,
Nhạc
,
Nhac tre
,
Quang Le
,
Nhac hot 2015
,
Nhac thieu nhi
,
Phuong My Chi
,
Karaoke
,
Hoai Lam
,
Son Tung MTP
,
Nhac Tru Tinh
,
Nhac xuan
,
Nhac vang
,
Nhac vang hai ngoai
,
Giong hat viet nhi 2015
,
Nhac phim
,
Nhac khong loi
,
Nhac che
,
Nhac Au My
,
Le Quyen
,
nhac hai ngoai
,
Nghe nhac
,
Nhac hay
,
nhac
,
zing mp3
,
Ca nhac
,
Nhac san
,
nghe nhạc hot
,
hai hoai linh 2015
,
Mò Kim Đáy Bể
,
Em Quay Về Đi
,
Xin Người Nhớ Tên
- | Tải nhạc Mp3 320kbps
| Album nhạc Video Clip
Nghe nhạc HAY online, Tải nhạc MP3 trực tuyến CỰC NHANH, Hot số 1
Chính sách sở hữu trí tuệ
© Copyright 2004-2015 NHAC.VUI.VN, all rights reserved - Powered by OCM 10
Cơ quan chủ quản: Công ty cổ phần dịch vụ phát triển người dùng MKO.
Trụ sở: Lô NV-B57 khu đô thị Trung Hoà Nhân Chính , phường Nhân Chính , quận Thanh Xuân , thành phố Hà Nội.
Tel : (84-4) 7 300 2828 - Fax : (84-4) 7 300 2828.

Content-Type: text/html; charset=Utf-8

X-Cache: QuickCache vv2.1.1rc1 - file

X-CacheDebug-1: Cache scriptkey is set to /index.php

X-CacheDebug-2: Cache varkey is set to GET=a:2:{s:13:"SERVER_REGION";s:2:"US";s:7:"web_url";s:64:"nhac-phim-nguyen-soai-vui-ve-various-artists-m332185c26p870.html";}

X-CacheDebug-3: Cachekey is set to f5acc3c23aaee086519b89158dd82396

X-CacheDebug-4: No (valid) cachedata for f5acc3c23aaee086519b89158dd82396

X-CacheDebug-5: Callback happened

X-CacheDebug-6: Writing cached data to storage

X-CacheDebug-7: Starting wrote cachefile /home/nhacvui/cache/quickcache/30/f5/qcc-f5acc3c23aaee086519b89158dd82396

X-CacheDebug-8: quickcache_filewrite wrote cachefile /home/nhacvui/cache/quickcache/30/f5/qcc-f5acc3c23aaee086519b89158dd82396

X-CacheDebug-10: Successfully wrote cachefile /home/nhacvui/cache/quickcache/30/f5/qcc-f5acc3c23aaee086519b89158dd82396


text:
Thứ Hai, ngày 10/5/2010 - 00:39
Còn 10 ngày nữa thì Nghị định 34 ngày 2-4-2010 của Chính phủ (quy định xử phạt vi phạm hành chính trong lĩnh vực giao thông đường bộ) có hiệu lực. Theo đó, nhiều hành vi vi phạm về giao thông sẽ bị áp dụng mức phạt mới nặng hơn so với hiện hành. Pháp Luật TP.HCM xin giới thiệu đến bạn đọc mức phạt tiền dành cho những vi phạm phổ biến.
Một quyết định ‘ngâm’ suốt chín năm trời
HủyTrả lời bình luận
Họ tên *
Email *
Nội dung bình luận
Coi chừng bị lừa từ tin nhắn điện thoại
Bắt được rùa dài hơn nửa mét, có nhiều hình lạ trên mai
Huyện cấp sai giấy đỏ nhưng chậm sửa chữa
Clip về sức mạnh của sự đoàn kết trong loài vật
© Báo điện tử Pháp Luật thành phố Hồ Chí Minh. Cơ quan chủ quản: Sở Tư Pháp Thành phố Hồ Chí Minh
Số giấy phép: 118/GP-BTTTT Cấp ngày 31-03-2014
Tổng Biên Tập: Mai Ngọc Phước. Tòa soạn: 34 Hoàng Việt, Phường 4, Quận Tân Bình, TPHCM
Tổng đài: (08)3991 0101 - 3991 4701; Phát hành: 3811 2421; Tiếp bạn đọc: (08)3991 9613. Fax: 3991 4661; Email: baophapluat@phapluattp.vn
Liên hệ Truyền Thông, quảng cáo: (08) 39914669 – Fax: (08) 39914606, Email: quangcao@phapluattp.vn
Powered by ePi Technologies

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

Content-Type: text/html; charset=utf-8

Set-Cookie: .ASPXANONYMOUS=_Wd-YoXFgyICTNf_bYRQqxGlM1aDU1WFYiD8lraANqm_G-5shWQREInLlH74mOcOXwTfEXRnAIPw1QjzmCNBIAyJTHdQqohpxDpJdZjnvKeaq8FsCOPqpmcb6lW0h_WrEbXz-VBBibaagygbp0otxA2; domain=plo.vn; expires=Sat, 12-Dec-2015 21:46:13 GMT; path=/; HttpOnly

Connection: close


text:
ĐỒNG NAI:
Thứ Năm, ngày 29/11/2012 - 15:56
Sự việc bắt đầu diễn ra khi một số hộ dân thuộc các xã Gia Canh, Phú Vinh, Phú Lợi (Định Quán, Đồng Nai) đứng ra thu mua lá điều khô với số lượng lớn. Các chủ đầu nậu trong vùng đứng ra mua lá điều khô với giá từ 800 – 1.000 đồng/kg rồi mang bán cho các thương lái từ xa khiến cơn sốt săn lùng lá điều ngày càng lên cao. Thấy lá khô bỗng dưng có thể tăng thu nhập nên hàng vạn người dân tại các xã này đã đổ xô đi quét, nhặt mang về bán.
Doanh nghiệp vận tải Quảng Ngãi đồng loạt giảm giá cước
HủyTrả lời bình luận
Họ tên *
Email *
Nội dung bình luận
Doanh nghiệp la bị hải quan ép
Người tiêu dùng chưa mặn mà với xăng sinh học
Ngành thuế nhận lỗi vì để tiểu thương hiểu nhầm
Clip về sức mạnh của sự đoàn kết trong loài vật
© Báo điện tử Pháp Luật thành phố Hồ Chí Minh. Cơ quan chủ quản: Sở Tư Pháp Thành phố Hồ Chí Minh
Số giấy phép: 118/GP-BTTTT Cấp ngày 31-03-2014
Tổng Biên Tập: Mai Ngọc Phước. Tòa soạn: 34 Hoàng Việt, Phường 4, Quận Tân Bình, TPHCM
Tổng đài: (08)3991 0101 - 3991 4701; Phát hành: 3811 2421; Tiếp bạn đọc: (08)3991 9613. Fax: 3991 4661; Email: baophapluat@phapluattp.vn
Liên hệ Truyền Thông, quảng cáo: (08) 39914669 – Fax: (08) 39914606, Email: quangcao@phapluattp.vn
Powered by ePi Technologies

Set-Cookie: .ASPXANONYMOUS=ADL2uLNHbTgikQeRUl1WdD0f791orZ2yGsvGacdRRxCe4TX75zaioi8sOhF_7RaFw4fDoi0gfoB-fSmSOsfLmGn94Ui8COEuDN5iei35HVtyBpVSKg57V5dnm_VkayTLlNfB1RXh4aptgdwOdFit2Q2; domain=plo.vn; expires=Sat, 12-Dec-2015 21:45:43 GMT; path=/; HttpOnly


text:
Thể loại
Quốc gia
Năm
- Server PHIMVÀNG
1
2
3
4
5
6
7
8-End
Copyright © 2013 PHIM7.COM.
Phim trên hệ thống PHIM7.COM đều được up trên các site chia sẻ video.
Mọi vấn đề về bản quyền vui lòng liên hệ: [email protected]Liên hệ quảng cáo.

WARC-Truncated: length

Content-Type: text/html

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Pragma: no-cache

Vary: Accept-Encoding

X-Cache: MISS

Server: cloudflare-nginx

Content-Encoding: gzip


text:
Phim Hay
Phim Mới
Phim Chiếu Rạp
Hành Động Mỹ
Kinh Dị
Võ Thuật
Hoạt Hình
Phim HD
Phim Bộ
LIÊN HỆ QUẢNG CÁO
Các Thể Loại Phim Hay
Tâm lý
Võ Thuật
Hành Động Mỹ
Kinh Dị
Viễn tuởng
Cổ Trang
Phiêu Lưu
Chiến Tranh
Hoạt Hình
Hài Hước
Tình Cảm
Hình Sự
Phim Lẻ
Thần Thoại
Tội Phạm
Phim Thành Long
Quốc Gia
Việt Nam
Trung Quốc
Hàn Quốc
Nhật Bản
Mỹ
Châu Á
Châu Âu
Thái Lan
Hồng Kông
Phim Hay Đề Cử
Cô Dâu 8 Tuổi
Huyền Thoại Ragnarok
Cám Ơn Cuộc Đời
Những Người Thừa Kế
Bad Boy J
Đảo Hải Tặc
Game Mobile Hay
Game
BigKool
cho Android,iOS
Cung
tai game ivegas
moi nhat cho mobile
Choi
game bigkool
mien phi
web
tai army
moi nhat
tai ibet88
cho moi may dien thoai
Phien ban
BigKool 2014
moi nhat
Link
tai bigone
tren may tinh
web
Tai bigkool 2015
moi nhat
Trang chủ
»
Vo Thuat
»
Chiến Binh Nữ Hổ
Tên Phim:
Chiến Binh Nữ Hổ
Đạo diễn:
Fu Huayang
Diễn viên:
Phan Sương Sương, Lâm Phong, An Chí Kiệt, Vương Đan...
Thời Lượng:
90 phút
Năm Phát Hành:
2013
Thể loại:
Vo Thuat
,
Để xem phim nhanh hơn click
Trong bộ phim này, Phan Sương Sương thủ vai một trong ba cô gái võ thuật cùng với đoàn thám hiểm vào khu rừng rậm Kena để khám phá cuộc sống của Hổ chiến một bộ tộc nguyên thủy trong truyền thuyết sống ẩn mình trong rừng sâu ...
Copyright © 2012
Phim Hay 365
- All rights reserved.
Mọi dữ liệu về phim trên website này đều được chúng tôi và các thành viên tham gia website tổng hợp từ các host như Google, Youtube, DailyMotion, Veoh, Megavideo, Youku, Clipvn, Blogcomvn, Tamtay, Stage6, MySpace, Bolt, Guba, OUOU,... Do đó, chúng tôi không chịu trách nhiệm về những dữ liệu được chia sẻ tại đây.
PhimHay365.Com is not responsible for any content linked to or referred to in this site. None of the video files are hosted on our servers; they are indexed and embedded in a fashion similar to Google and other popular search engines. All clips are collected from and hosted by Google, Youtube, DailyMotion, Veoh, Megavideo, Youku, Clipvn, Blogcomvn, Tamtay, Stage6, MySpace, Bolt, Guba, OUOU, and many others respected providers. If you believe your copyrighted content is showing on PhimHay365.Com
phim hay
,
Doc truyen Online
, game
M88
, club
m88
,
M88
mobile,
Mansion88
, Dich vu
Dao tao ke toan
chuyen nghiep,
Phim hay
truyen tinh yeu
hay,
truyen ma
kinh di,Doc
Truyen Hay
tren Mobile, tai
iOnline
mien phi
Thu nhỏ

Cache-Control: private


text:
PhimHP.com là trang web xem phim online hoàn toàn miễn phí, với nhiều bộ phim được cập nhanh và có chất lượng cao. Đặc biệt nhiều các bộ phim hành động, võ thuật và phim hd chất lượng cao
PhimHP.com hiển thị tốt nhất với trình duyệt Firefox hoặc Google Chrome ở độ phân giải 1366x768 !
PhimHP.com tin dùng DigitalOcean, Linode và Vultr VPS hosting.
About, Privacy, Terms & Conditions, Copyright, FAQ, Contact, Nhận phim qua Email

markdown: **PhimHP.com** là **trang web xem phim** online hoàn toàn miễn phí, với nhiều bộ phim được cập nhanh và có chất lượng cao. Đặc biệt nhiều các bộ phim [hành động](http://phimhp.com/phim-hanh-dong.g1p1/), [võ thuật](http://phimhp.com/phim-vo-thuat.g2p1/) và [phim hd chất lượng cao](http://phimhp.com/phim-hd-phim-chat-luong-cao.g33p1/) **PhimHP.com** hiển thị tốt nhất với trình duyệt [ hoặc Firefox](http://phimhp.com/blog-huong-dan-cai-dat-firefox-tren-windows.post2.html) [ở độ phân giải 1366x768 !](http://phimhp.com/blog-huong-dan-cai-dat-google-chrome-tren-windows.post3.html) **Google Chrome** **PhimHP.com** tin dùng [DigitalOcean](http://u.f8vn.net/digitalocean.html), [Linode](http://u.f8vn.net/linode.html) và [Vultr VPS](http://u.f8vn.net/vultr.html) hosting. [About](http://phimhp.com/blog-about-me.post8.html), [Privacy](http://phimhp.com/blog-privacy.post1.html), [Terms & Conditions](http://phimhp.com/blog-terms-and-conditions.post17.html), [Copyright](http://phimhp.com/blog-legal-disclaimer-and-dmca.post5.html), [FAQ](http://phimhp.com/blog-faq.post6.html), [Contact](http://phimhp.com/blog-lien-he-quang-cao.post4.html), [Nhận phim qua Email](http://feedburner.google.com/fb/a/mailverify?uri=xem-phim-online-chat-luong-cao)

Server: Apache/2.2.15 (CentOS)

Cache-Control: max-age=0, no-cache, no-store, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0


text:
Bộ phim truyền hình mới của Jung Il Woo, "Flower
Boys of the Ramen Shop" vừa tìm được một "mỹ nam" nữa. Lee Ki Woo, vừa
hoàn thành nghĩa vụ quân sự ngày 1 tháng Chín, đã nhận lời tham gia bộ
phim trong vai Choi Kang Hyuk, một đầu bếp thiên tài đến từ Nhật Bản.
Nhà sản xuất đã chọn nam diễn viên này vì anh thích hợp với hình ảnh của một người anh trai cũng như một anh chàng lãng mạn. Bộ phim gần đây nhất của Lee Ki Woo là vào năm 2008 "A Star ‘s Lover ", diễn chung với Choi Ji Woo, Yoo Ji Tae, Ki Tae Young và Choi Phillip.
"Flower Boys of the Ramen Shop" là bộ phim hài lãng mạn xoay quanh một nhóm các chàng trai đẹp, điều hành một cửa tiệm mì đã thu hút sự chú ý của các nữ sinh năng động. Bộ phim sẽ có 16 tập.

Server: Apache/2.2.23 (CentOS)

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


text:
Andrea Hoang
Trang chủ
Điểm đến
Tin tức sự kiện
Cân bằng cuộc sống
Cộng đồng
Kaspersky Care
Đăng nhập
Đăng ký
Liên hệ quảng cáo:
(08) 3518 0279
Hỗ trợ:
Ẩm thực
Nhà hàng
Nhà hàng Việt Nam
Nhà hàng Hàn Quốc
Nhà hàng Nhật Bản
Nhà hàng Thái Lan
Nhà hàng Trung Quốc
Nhà hàng Ấn Độ
Nhà hàng Pháp
Nhà hàng Ý
Nhà hàng hải sản
Nhà hàng buffet
Nhà hàng chay
Nhà hàng tổng hợp
Nhà hàng thức ăn nhanh
Nhà hàng bia tươi
Nhà hàng tiệc cưới
Quán ăn ngon
Quán lẩu
Quán cơm
Quán phở
Quán bánh
Quán ốc
Thức uống
Quán cafe
Quán trà
Quán kem
Tiệm bánh
Tiệm bánh ngọt
Tiệm bánh mì
Mua Sắm
Shop quà tặng
Shop hoa
Shop thời trang
Trung tâm áo cưới - studio
Shop thời trang nam
Shop thời trang tổng hợp
Shop thời trang nữ
Shop thời trang trẻ em
Shop phụ kiện
Shop thể thao
Hàng gia dụng
Nhà sách
Siêu thị
Công Nghệ
Cửa hàng máy tính
Cửa hàng máy ảnh
Cửa hàng điện thoại
Cửa hàng phần mềm
Giải trí
Phòng trà
Karaoke
Xem ca nhạc kịch
Quán bar
Rạp chiếu phim
Khu vui chơi
Giáo dục
Trung tâm dạy nghề
Trung tâm ngoại ngữ
Trung tâm tin học
Trung tâm luyện thi
Sức khỏe làm đẹp
Thể dục thể thao
Thể dục thẩm mỹ
Sân bóng đá
Sân cầu lông
Sân bóng bàn
Sân bóng rổ
Sân Tennis
Hồ bơi
Thể thao tổng hợp
Trung tâm làm đẹp
Shop mỹ phẩm
Spa và massage
Trung tâm chăm sóc tóc
Nha khoa
Blog
Ẩm thực
Giải trí
Thời trang
Góc video
TRANG CHỦ
|
ĐIỂM ĐẾN
|
ƯU ĐÃI
|
CÂN BẰNG CUỘC SỐNG
|
CỘNG ĐỒNG
|
SITEMAPS
Copyright © 2011
ProGuide.vn™
. All rights reserved
Giới thiệu
|
Liên hệ
|
Quảng cáo
|
Quy chế hoạt động
|
Tuyển dụng
ĐĂNG NHẬP
Tài khoản:
Mật khẩu:
Bạn quên mật khẩu ?
Ghi nhớ
Bạn có thể đăng nhập bằng những dịch vụ sau:
Chỉ 1 phút
Bạn sẽ giúp Proguide.vn hoàn thiện & phục vụ bạn tốt hơn.
Hãy tham gia bài khảo sát ngắn của Proguide.vn nhé!
Đồng ý
Lúc khác
Từ chối
Chỉ 1 phút


text:
- Áo khoác Hàn Quốc tay đính nút kiểu dáng trẻ trung mang đến phong cách thời trang, cá tính và thanh lịch.
- Kiểu dáng mới nhất cực Hot.
- Giúp chống nắng bảo vệ làn da mái tóc hiệu quả.
- Chất liệu thun Nỉ cao cấp dày vừa phải thấm hút mồ hôi tốt.
- Thiết kế cực tinh tế khóa xéo phá cách và nổi bật.
- Tay bo thun đính nút tinh tế.
- Phần mũ áo rộng có thể giữ nếp tóc khỏi rối khi gặp gió.
- Màu sắc cá tính, thời trang.
- Xuất xứ: Việt Nam.
- Màu sắc: da bò, hồng (như hình ảnh)
- Kích thước: dài 60cm, ngang ngực 52cm, ngang vai 41cm, dài tay 57m, mũ 37cm.
Giao SẢN PHẨM miễn phí tận nhà quý khách hoặc quý khách có thể đến SHOP Rẻ Từng Giây để nhận hàng (theo giá đang bán,giảm thêm 5.000vnđ)
Địa chỉ SHOP RETUNGGIAY : 143 LÊ ĐẠI HÀNH ,PHƯỜNG 6 , QUẬN 11
Khách hàng đến mua tại Cửa hàng vui lòng điện thoại đặt hàng trước qua hotline
- Mỗi khách hàng có thể mua 1 hoặc nhiều sản phẩm.
Khách hàng vui lòng nhận sản phẩm theo tình trạng hiện có tại VP Retunggiay. Khách hàng đăng ký giao hàng tận nơi được giao màu ngẫu nhiên.
- Vui lòng kiểm tra kỹ sản phẩm khi nhận hàng. Rẻ Từng Giây.VN sẽ không chịu trách nhiệm đổi trả sau khi đã giao sản phẩm cho khách hàng.
Khách hàng ở TPHCM giao sản phẩm và thu tiền miễn phí - Thu phí 10.000đ đối với các quận ngoại thành (Q2,Q.9, Q.12, Q.7, Q.Thủ Đức) - Thu phí 20.000đ đối với các huyện ngoại thành (H. Hóc Môn, H.Bình Chánh, H.Nhà Bè)
+ Khi nhân viên giao hàng retunggiay.vn đã giao sản phẩm cho quý khách, nếu quý không không ưng ý sản phẩm, vui lòng thanh toán phí giao hàng 5.000đ / hóa đơn (chỉ áp dụng đối với TPHCM)
+ Khách hàng ở tỉnh thành khác (ngoài TPHCM), giao hàng và thu tiền tận nơi qua đường bưu điện, phí vận chuyển cho sản phẩm này là 30,000đ, cộng thêm 5,000đ đến 10,000đ phí vận chuyển khi mua thêm sản phẩm tiếp theo. Hoăc giao hàng bằng xe khách ..... vui lòng liên hệ hotline 0994876925
- Y!M: dichvu_khachhang247
-Facebook: https://www.facebook.com/retunggiayvn

markdown:
![Áo khoác Hàn Quốc tay đính nút mẫu mới 2013 chỉ 92.000 vnđ. Áo khoác Hàn Quốc tay đính nút mẫu mới 2013 chỉ 92.000 vnđ.](http://retunggiay.vn/data/images/2014_02/21/hinhvuongbentrongtaynut7516.jpg)
-
[Áo khoác Hàn Quốc](http://www.retunggiay.vn/tp-ho-chi-minh/deal/2136/ao-khoac-han-quoc-tay-dinh-nut-mau-moi-2013-chi-115-000-vnd-chat-lieu-ni-cao-cap-thoi-trang-khoa-xeo-%2Ctay-dinh-nut-cuc-dep-hotdeal-nay-chi-co-tai-retunggiay-vn.html) tay đính nút kiểu dáng trẻ trung mang đến phong cách thời trang, cá tính và thanh lịch.
- Kiểu dáng mới nhất cực Hot.
- Giúp chống nắng bảo vệ làn da mái tóc hiệu quả.
- Chất liệu thun Nỉ cao cấp dày vừa phải thấm hút mồ hôi tốt.
- Thiết kế cực tinh tế khóa xéo phá cách và nổi bật.
- Tay bo thun đính nút tinh tế.
- Phần mũ áo rộng có thể giữ nếp tóc khỏi rối khi gặp gió.
- Màu sắc cá tính, thời trang.
- Xuất xứ: Việt Nam.
- Màu sắc: da bò, hồng (như hình ảnh)
- Kích thước: dài 60cm, ngang ngực 52cm, ngang vai 41cm, dài tay 57m, mũ 37cm.
Giao SẢN PHẨM miễn phí tận nhà quý khách hoặc quý khách có thể đến SHOP Rẻ Từng Giây để nhận hàng (theo giá đang bán,giảm thêm 5.000vnđ)
Địa chỉ SHOP RETUNGGIAY : 143 LÊ ĐẠI HÀNH ,PHƯỜNG 6 , QUẬN 11
Khách hàng đến mua tại Cửa hàng vui lòng điện thoại đặt hàng trước qua hotline
- Mỗi khách hàng có thể mua 1 hoặc nhiều sản phẩm.
*Khách hàng vui lòng nhận sản phẩm theo tình trạng hiện có tại VP Retunggiay. Khách hàng đăng ký giao hàng tận nơi được giao màu ngẫu nhiên.*
- Vui lòng kiểm tra kỹ sản phẩm khi nhận hàng. Rẻ Từng Giây.VN sẽ không chịu trách nhiệm đổi trả sau khi đã giao sản phẩm cho khách hàng.
Khách hàng ở TPHCM giao sản phẩm và thu tiền miễn phí - Thu phí 10.000đ đối với các quận ngoại thành (Q2,Q.9, Q.12, Q.7, Q.Thủ Đức) - Thu phí 20.000đ đối với các huyện ngoại thành (H. Hóc Môn, H.Bình Chánh, H.Nhà Bè)
+ Khi nhân viên giao hàng retunggiay.vn đã giao sản phẩm cho quý khách, nếu quý không không ưng ý sản phẩm, vui lòng thanh toán phí giao hàng 5.000đ / hóa đơn (chỉ áp dụng đối với TPHCM)
+ Khách hàng ở tỉnh thành khác (ngoài TPHCM), giao hàng và thu tiền tận nơi qua đường bưu điện, phí vận chuyển cho sản phẩm này là 30,000đ, cộng thêm 5,000đ đến 10,000đ phí vận chuyển khi mua thêm sản phẩm tiếp theo. Hoăc giao hàng bằng xe khách ..... vui lòng liên hệ hotline 0994876925
- Y!M: dichvu_khachhang247
-Facebook:
[https://www.facebook.com/retunggiayvn](https://www.facebook.com/retunggiayvn)
# Áo khoác Hàn Quốc tay đính nút mẫu mới 2013 chỉ 92.000 vnđ.92.000
__đ__

Vary: Accept-Encoding,User-Agent


text:
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 1
Chia sẻ: Doc Tai | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:15
lượt xem 125
download
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 1
MỞ ĐẦU Công nghệ sinh học là sự ứng dụng tổng hợp của sinh hóa học, vi sinh vật học và các khoa học về công nghệ để đạt đến sự ứng dụng công nghiệp các năng lực của vi sinh vật, của các tế bào, các tổ chức nuôi cấy và các thành phần của chúng. Công nghệ sinh học như một thân cây mà những rễ chính của cây này là vi sinh vật học, di truyền học, sinh hóa học, điện tử học, nông học, công nghệ học…và trên vòm lá với hàng nghìn quả đó là các...
Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!
Nội dung Text: Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 1
- 1 MỞ ĐẦU Công nghệ sinh học là sự ứng dụng tổng hợp của sinh hóa học, vi sinh vật học và các khoa học về công nghệ để đạt đến sự ứng dụng công nghiệp các năng lực của vi sinh vật, của các tế bào, các tổ chức nuôi cấy và các thành phần của chúng. Công nghệ sinh học như một thân cây mà những rễ chính của cây này là vi sinh vật học, di truyền học, sinh hóa học, điện tử học, nông học, công nghệ học…và trên vòm lá với hàng nghìn quả đó là các loại sản phẩm phục vụ trồng trọt, chăn nuôi, y học, năng lượng mới, vật liệu mới, tuyển khoáng, bảo vệ môi trường... Nhờ ứng dụng các thành tựu mới mẻ của công nghệ sinh học như kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào, kỹ thuật tái tổ hợp di truyền, người ta có thể tạo ra được những giống cây trồng không những có năng suất cao mà còn chống chịu được với sâu bệnh, hạn hán và điều kiện nghèo phân bón. Nhờ bỏ qua được việc lai chéo và khắc phục được sự tương khắc sinh sản mà việc lai tạo giống rút ngắn được nhiều thời gian. Kỹ thuật tái tổ hợp AND và các kỹ thuật in vitro mở ra khả năng lai khác loài và làm tăng nhanh tính đa dạng di truyền. Đối với các loại cây trồng có giá trị thương mại lớn, kỹ thuật nuôi cấy mô đã đem lại những hiệu quả kinh tế hết sức rõ rệt. Hiện nay, người ta đã bắt đầu ứng dụng khả năng nuôi cấy tế bào thực vật tách rời ở qui mô công nghiệp để thu nhận các sản phẩm, các hoạt chất sinh học có giá trị kinh tế cao. Nuôi cấy mô tế bào thực vật là một ngành khoa học trẻ có nhiều triển vọng, được ứng dụng nhiều trong các lĩnh vực kinh tế. Ý thức được triển vọng to lớn của ngành khoa học hiện đại này, chúng tôi xin giới thiệu quyển sách công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật nhằm phục vụ sinh viên, học viên sau đại học và các cơ quan có liên quan . Nội dung cuốn sách bao hàm toàn bộ những vấn đề cơ bản trong nội dung công nghệ nuôi cấy mô thực vật. Chúng tôi xin cảm ơn GS. Trần Văn Minh đã cung cấp cho chúng tôi nhiều tài liệu chính để biên soạn. Chúng tôi chân thành cảm ơn nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật và ban biên tập cho xuất bản để cuốn sách được sớm đến với bạn đọc. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 2 Phần 1. NUÔI CẤY TẾ BÀO Chương 1. GIỚI THIỆU CHUNG VÀ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN 1.1. Giới thiệu chung Khái niệm biotechnology - công nghệ sinh học đã được đề xuất năm 1917 bởi một kỹ sư người Hungari tên là Karl Erky để mô tả quá trình chế biến củ cải đỏ làm nguồn thức ăn phục vụ sản xuất lợn với qui mô lớn. Theo Karl Erky, Biotechnology là từ dùng để chỉ "Tất cả những công việc trong đó các sản phẩm được sản xuất ra từ các nguyên liệu thô với sự giúp đỡ của các vật chất sống". Năm 1961 một nhà vi sinh vật học người Thuỵ Điển là Carl Goren Hedén đề nghị đổi tên tạp chí khoa học Journal of microbiological and Biochemical Engineering and technology thành Biotechnology and Bioengineering để đăng tải các nghiên cứu trong lĩnh vực vi sinh học ứng dụng và lên men công nghiệp. Từ đó, Biotechnology đã trở nên rõ ràng và luôn gắn liền với những nghiên cứu về "sự sản xuất công nghiệp các loại hàng hoá và dịch vụ thông qua các quá trình có sử dụng các cơ thể, hệ thống sinh học và chế biến". Các nghiên cứu về công nghệ sinh học đã được phát triển dựa trên các lĩnh vực chuyên môn như vi sinh, hoá sinh và công nghệ hóa học. Công nghệ sinh học theo W.H Stone (1987) có thể định nghĩa: “Là những công nghệ sử dụng các cơ thể sống hoặc các phần của cơ thể như tế bào, để tạo ra hoặc thay đổi các sản phẩm nhằm cải tiến các cây trồng và vật nuôi, hoặc phát triển các vi sinh vật vào các ứng dụng đặc hiệu”. Theo liên đoàn công nghệ sinh học châu Âu (EFB): “Công nghệ sinh học là ứng dụng tổng hợp của sinh hoá học, vi sinh vật và các khoa học về công nghệ để đạt tới sự ứng dụng công nghiệp các năng lực của vi sinh vật, của các tế bào, các tổ chức nuôi cấy và các thành phần của chúng.” Đến nay, định nghĩa về công nghệ sinh học được nhiều nhà khoa học cũng như nhiều nước trên thế giới thống nhất như sau: Công nghệ sinh học là các quá trình sản xuất ở quy mô công nghiệp có sự tham gia của các tác nhân sinh học (ở mức độ cơ thể, tế bào hoặc dưới tế bào) dựa trên các thành tựu tổng hợp của nhiều bộ môn khoa học, phục vụ cho việc tăng của cải vật chất của xã hội và bảo vệ lợi ích của con người. Theo quan điểm hiện đại, các tác nhân sinh học tham gia vào quá trình sản xuất ở trên là những giống sinh vật mới hoặc các sản phẩm của chúng được tạo ra bằng kỹ thuật di truyền hiện đại (công nghệ gen). Từ định nghĩa cô đọng này có thể thấy: + Công nghệ sinh học không phải là một bộ môn khoa học như toán, lý, hoá, sinh học phân tử... mà là một phạm trù sản xuất. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 3 + Công nghệ sinh học không chỉ tạo ra thêm của cải vật chất, mà còn hướng vào việc bảo vệ và tăng cường chất lượng cuộc sống con người. + Thực tế, công nghệ sinh học mang tính ứng dụng, tuy nhiên hàng loạt kỹ thuật của công nghệ sinh học đang là những công cụ sắc bén để nghiên cứu khoa học sinh học và làm sáng tỏ các cơ chế của các hiện tượng sống ở mức phân tử. ở nước ta, theo Nghị định số 18/CP của Chính phủ ngày 11/3/1994 về phát triển công nghệ sinh học thì: “Công nghệ sinh học là một tập hợp các ngành khoa học (sinh học phân tử, di truyền học, vi sinh vật học, sinh hóa học và công nghệ học) nhằm tạo ra các công nghệ khai thác ở quy mô công nghiệp các hoạt động sống của vi sinh vật, tế bào thực vật và động vật.” - Khái niệm về công nghệ sinh học nông nghiệp (Agriculture Biotechnology) Theo Nghị định số 18/CP của Chính phủ ngày 11/3/1994 về phát triển công nghệ sinh học ở Việt nam thì: “Công nghệ sinh học là một tập hợp các ngành khoa học (sinh học phân tử, di truyền học, vi sinh vật học, sinh hóa học và công nghệ học) nhằm tạo ra các công nghệ khai thác ở quy mô công nghiệp các hoạt động sống của vi sinh vật, tế bào thực vật và động vật.” Vậy, “Công nghệ sinh học nông nghiệp là một tập hợp các ngành khoa học (sinh học phân tử, di truyền học, vi sinh vật học, sinh hoá học và công nghệ học) nhằm tạo ra các công nghệ sản xuất sản phẩm nông nghiệp ở quy mô công nghiệp.” Chúng ta có thể hiểu, công nghệ sinh học nông nghiệp là một nhánh của công nghệ sinh học mà đối tượng phục vụ là sản xuất nông nghiệp; cụ thể là ứng dụng các thành tựu chung của công nghệ sinh học để phục vụ cho sản xuất nông nghiệp của con người Dựa vào việc ứng dụng thành tựu của công nghệ sinh học để phục vụ các chuyên ngành khác nhau trong sản xuất nông nghiệp mà người ta có thể chia công nghệ sinh học nông nghiệp thành 2 loại sau: - Công nghệ sinh học trong trồng trọt (bao gồm cả trồng cây lâm nghiệp, cây dược liệu) gồm nuôi cấy mô tế bào thực vật, nuôi cấy hạt phấn, chuyển gen vào tế bào thực vật chủ... - Công nghệ sinh học trong chăn nuôi (bao gồm cả chăn nuôi thuỷ sản) gồm nuôi cấy mô tế bào động vật, sản xuất tế bào gốc, cấy chuyển phôi, nhân bản vô tính... Hiện nay, từ những thành tựu của công nghệ sinh học trong nuôi cấy mô tế bào, nuôi cấy hạt phấn và chuyển gen có thể ứng dụng rất nhiều vào lĩnh vực trồng trọt, như: - Nhân nhanh vô tính các giống cây quý: từ một mẫu nuôi cấy người ta có thể tạo ra hàng triệu cây con như nhau nếu đủ thời gian cấy chuyển. Tuy nhiên, hệ số cấy chuyển phụ thuộc tuỳ giống, càng cấy chuyển nhiều lần càng tạo nhiều biến dị. Ví dụ, các nhà khoa học đã kết luận từ một chồi dứa đưa vào nuôi cấy trong ống nghiệm có thể nhân ra hàng triệu cây dứa giống; từ một chồi chuối đưa vào nuôi cấy có thể nhân ra 2.000 cây Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 4 chuối giống, nếu qua số này sẽ có tỷ lệ biến dị cao. - Cải lương giống cây trồng bằng nuôi cấy đỉnh sinh trưởng (meristerm): để phục tráng những giống cây quý đã nhiễm virus người ta có thể nuôi cấy đỉnh sinh trưởng để nhân nhanh. Qua một số lần nuôi cấy theo kiểu này sẽ tạo ra được những cây hoàn toàn sạch bệnh từ cây đã nhiễm virus. - Tạo dòng đơn bội từ nuôi cấy bao phấn và nuôi cấy tế bào hạt phấn: Người ta đã ứng dụng kĩ thuật nuôi cấy bao phấn và hạt phấn để tạo những cây đơn bội từ bao phấn hoặc hạt phấn, sau đó lưỡng bội hoá và tạo thành dòng đồng hợp tử. Kĩ thuật này đã thành công nhiều ở những cây họ cà. - Khắc phục lai xa bằng cách thụ phấn trong ống nghiệm nhờ kĩ thuật nuôi cấy phôi: Nhờ nuôi cấy trong ống nghiệm đã khắc phục tính bất hợp giao tử trước và sau khi thụ tinh đối với lai giữa các cây khác nhau khá xa về mặt di truyền. - Lai vô tính còn gọi là dung nạp tế bào trần (Protoplast): Nhờ kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật mà người ta đã tạo thành cây lai từ 2 giống khác nhau khá xa về mặt di truyền bằng cách dùng các enzim để hoà tan màng tế bào rồi cho các tế bào trần (không còn màng) vào nuôi cấy chung trong môi trường nhân tạo và chúng phát triển thành khối mô sẹo (callus), từ đó chuyển khối callus này sang các môi trường phân hoá chức năng tế bào và để nuôi cấy thành cây lai. - Tạo giống cây trồng mới bằng kĩ thuật chuyển gen: Trên cơ sở xác định được tính trạng quý mà gen quy định, người ta có thể chuyển những gen đó vào những cây trồng khác với mong muốn tạo được những giống mới mang đặc tính mong muốn. 1.2. Sơ lược lịch sử phát triển Năm 1665, Robert Hooke quan sát thấy tế bào sống dưới kính hiển vi và đưa ra khái niệm "tế bào - Cell". Anton Van Leuwen Hoek (1632-1723) thiết kế kính hiển vi khuyếch đại được 270 lần, lần đầu tiên quan sát thấy vi khuẩn, tế bào tinh trùng trong tinh dịch người và động vật. Năm 1838, Matthias Schleiden và Theodore Schwann đề xướng học thuyết cơ bản của sinh học gọi là Học thuyết tế bào: + Mọi cơ thể sống được cấu tạo bởi một hoặc nhiều tế bào. + Tế bào là đơn vị cấu trúc và chức năng cơ bản của cơ thể sống, là hình thức nhỏ nhất của sự sống. + Tế bào chỉ được tạo ra từ tế bào tồn tại trước đó. Năm 1875, Oscar Hertwig chứng minh bằng quan sát trên kính hiển vi rằng sự thụ thai là do sự hợp nhất của nhân tinh trùng và nhân trứng. Sau đó, Hermann P., Schneider F.A và Butschli O. đã mô tả chính xác quá trình phân chia tế bào. Năm 1883, Wilhelm Roux lần đầu tiên lý giải về phân bào giảm nhiễm ở cơ quan sinh dục. Từ một tế bào thực vật nuôi cấy in vitro có thể tái sinh thành một cơ thể sống hoàn chỉnh. Khả năng này của Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 5 tế bào thực vật được gọi là tính toàn năng. Năm 1902, Haberlandt lần đầu tiên thí nghiệm nuôi cấy mô cây một lá mầm nhưng không thành công. Năm 1934, Kogl lần đầu tiên xác định được vai trò của IAA, 1 hoocmon thực vật đầu tiên thuộc nhóm auxin có khả năng kích thích sự tăng trưởng và phân chia tế bào. Năm 1939, ba nhà khoa học Gautheret, Nobecourt và White đã đồng thời nuôi cấy mô sẹo thành công trong thời gian dài từ mô thượng tầng (cambium) ở cà rốt và thuốc lá, mô sẹo có khả năng sinh trưởng liên tục. Năm 1941, Overbeek và cs đã sử dụng nước dừa trong nuôi cấy phôi non ở cây cà rốt Datura. Năm 1955, Miller và cs đã phát minh cấu trúc và sinh tổng hợp của kinetin - một cytokinin đóng vai trò quan trọng trong phân bào và phân hoá chồi ở mô nuôi cấy. Đến năm 1957, Skoog và Miller đã khám phá vai trò của tỷ lệ nồng độ các chất auxin: cytokinin trong môi trường đối với sự phát sinh cơ quan (rễ hoặc chồi). Khi tỷ lệ auxin/ cytokinin (ví dụ: nồng độ IAA/ nồng độ kinetin) nhỏ hơn 1 và càng nhỏ, mô có xu hướng tạo chồi. Ngược lại khi nồng độ IAA/ nồng độ kinetin lớn hơn 1 và càng lớn, mô có xu hướng tạo rễ. Tỷ lệ nồng độ auxin và cytokinin thích hợp sẽ kích thích phân hoá cả chồi và rễ, tạo cây hoàn chỉnh. Năm 1949, Limmasets và Cornuet đã phát hiện rằng virus phân bố không đồng nhất trên cây và thường không thấy có virus ở vùng đỉnh sinh trưởng. Năm 1952, Morel và Martin đã tạo ra cây sạch bệnh virus của 6 giống khoai tây từ nuôi cấy đỉnh sinh trưởng. Ngày nay, kỹ thuật này với một số cải tiến đã trở thành phương pháp loại trừ bệnh virus được dùng rộng rãi đối với nhiều loài cây trồng khác nhau. Năm 1952, Morel và Martin lần đầu tiên thực hiện vi ghép in vitro thành công. Kỹ thuật vi ghép sau đó đã được ứng dụng rộng rãi trong tạo nguồn giống sạch bệnh virus và tương tự virus ở nhiều cây trồng nhân giống bằng phương pháp vô tính khác nhau, đặc biệt là tạo giống cây ăn quả sạch bệnh. Năm 1960, Morel đã thực hiện bước ngoặt cách mạng trong sử dụng kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng trong nhân nhanh các loại địa lan Cymbidium, mở đầu công nghiệp vi nhân giống thực vật. Năm 1960, Cocking lần đầu tiên sử dụng enzym phân giải thành tế bào và đã tạo ra số lượng lớn tế bào trần. Kỹ thuật này sau đó đã được hoàn thiện để tách nuôi tế bào trần ở nhiều cây trồng khác nhau. Năm 1971, Takebe và cs đã tái sinh được cây từ tế bào trần mô thịt lá (mesophill cell) ở thuốc lá. Năm 1972, Carlson và cs lần đầu tiên thực hiện lai tế bào sôma giữa các loài, tạo được cây từ dung hợp tế bào trần của 2 loài thuốc lá Nicotiana glauca và N. langsdorfii. Năm 1978, Melchers và cs tạo được cây lai soma "Cà chua Thuốc lá" bằng lai xa tế bào trần của 2 cây này. Đến nay, việc tái sinh cây hoàn chỉnh từ tế bào trần hoặc từ lai tế bào trần đã thành công ở nhiều loài thực vật. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 6 Năm 1964, Guha và Maheshwari lần đầu tiên thành công trong tạo được cây đơn bội từ nuôi cấy bao phấn của cây cà Datura. Kỹ thuật này sau đó đã được nhiều tác giả phát triển và ứng dụng rộng rãi trong tạo dòng đơn bội (1x), dòng thuần nhị bội kép (2x), cố định ưu thế lai (nuôi cấy bao phấn hoặc hạt phấn của dòng lai F1 để tạo giống thuần mang tính trạng ưu thế lai). Năm 1959, Tulecke và Nickell đã thử nghiệm sản xuất sinh khối mô thực vật quy mô lớn (134 lít) bằng nuôi cấy chìm. Năm 1977, Noguchi và cs đã nuôi cấy tế bào thuốc lá trong bioreactor dung tích lớn 20,000 lít. Năm 1978, Tabata và cs đã nuôi tế bào cây thuốc ở quy mô công nghiệp phục vụ sản xuất shikonin. Họ đã chọn lọc được dòng tế bào cho sản lượng các sản phẩm thứ cấp (shikonin) cao hơn. Năm 1985, Flores và Filner lần đầu tiên sản xuất chất trao đổi thứ cấp từ nhân nuôi rễ tơ ở Hyoscyamus muticus. Những rễ này sản xuất nhiều hoạt chất hyoscyamine hơn cây tự nhiên. Hiện nay, công nghệ nuôi cấy tế bào và mô (ví dụ, mô rễ của nhân sâm) trong các bioreactor dung tích lớn đã được thương mại hoá ở mức công nghiệp để sản xuất sinh dược. Năm 1981, trên cơ sở quan sát các biến dị xảy ra rất phổ biến trong nuôi cấy mô và tế bào với phổ biến dị và tần số biến dị cao, Larkin và Scowcroft đã đưa ra thuật ngữ "biến dị dòng soma" (Somaclonal Variation) để chỉ các thay đổi di truyền tính trạng xảy ra do nuôi cấy mô và tế bào in vitro. Từ các dòng tế bào hoặc cây biến dị di truyền ổn định có thể nhân nhanh, tạo ra các dòng và giống đột biến có năng suất, hàm lượng hoạt chất hữu ích cao, kháng một số các điều kiện bất lợi như bệnh, mặn, hạn,… Đến nay các nhà khoa học đã khẳng định rằng mức độ thành công của chuyển gen vào cây trồng phụ thuộc rất nhiều vào hệ thống nuôi cấy và tái sinh tế bào thành cây in vitro sau chuyển gen. Năm 1974, Zaenen và cs đã phát hiện plasmid Ti đóng vai trò là yếu tố gây u (crown gall) ở cây trồng. Năm 1977, Chilton và cs đã chuyển thành công T- DNA vào thực vật. Năm 1979, Marton và cs đã xây dựng quy trình chuyển gen vào tế bào trần bằng đồng nuôi cấy tế bào trần và Agrobacterium. Năm 1982, Krens đã chyển thành công DNA vào tế bào trần. Năm 1985, Fraley và cs thiết kế vector plasmid Ti đã loại bỏ các gen độc gây hại để sử dụng cho việc thiết kế vector chuyển gen vào thực vật. Cùng trong năm, Horsch và cs đã chuyển gen vào mảnh lá bằng Agrobacterium tumefaciens và tái sinh cây chuyển gen. An và cs (1985) đã phát triển hệ thống hai vector cho chuyển gen thực vật. Năm 1987, Klein và cs đã sử dụng súng bắn gen (particle gun) mang vi đạn trong chuyển gen và tái sinh được cây biểu hiện gen chuyển. Năm 1994, thương mại hoá giống cà chua chuyển gen 'FlavrSavr' Các bước phát triểntrong lịch sử công nghệ tế bào thực vật được tóm tắt ở bảng 1.1. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 7 Bảng 1.1. Những mốc chính trong lịch sử phát triển của công nghệ tế bào thực vật Năm Những phát minh và sự kiện quan trọng 1665 Robert Hooke quan sát được tế bào sống dưới kính hiển vi và đưa ra khái niệm tế bào. 1838 Matthias Schleiden và Theodore Schwann đề xướng học thuyết tế bào. Schleiden M. J., Arch. Anat., Physiol. U. wiss. Med. (J. Muller), 1838: 137-176; Schwann T., W. Engelman, No. 176 (1910). 1902 Haberlandt lần đầu tiên thí nghiệm nuôi cấy mô cây một lá mầm nhưng không thành công. Haberlandt G., Sitzungsber Akad. Wiss. Wien, Math.-Naturwiss. Kl., 111: 69-92. 1904 Hannig tiến hành các thí nghiệm nuôi cấy phôi đầu tiên ở các loài họ cải Crucifers. Hannig B., Bot. Zeitung, 62: 45-80. 1922 Cho hạt phong lan nảy mầm in vitro. Knudson L., Bot. Gaz., 73: 1-25. 1924 Hình thành callus từ rễ cà rốt trong môi trường có acid lactic. Blumenthal F. and Meyer P. Z. Krebsforsch. 21: 250-252. 1925 Làm hạt phong lan nảy mầm in vitro. Knudson L., Bot. Gaz., 29: 345-379. 1929 Laibach sử dụng nuôi cấy phôi để khắc phục hiện tượng bất hoà hợp khi lai ở Linum spp. Laibach F., J Hered., 20: 201-208. 1934 White đã thành công khi nuôi cấy mô rễ cà chua trong thời gian dài. White P. R., Plant Physiol., 9: 585-600. 1934 Kogl lần đầu tiên xác định được vai trò của IAA, 1 hoocmon thực vật đầu tiên có khả năng kích thích sự tăng trưởng và phân chia tế bào. Kogl F. et al., Z. Physiol. Chem., 228: 90-103. 1936 Nuôi cấy phôi các loài cây hạt trần khác nhau. LaRue C. R., Bull. Torrey Bot. Club, 63: 365-382 1939 Gautheret, Nobecourt và White lần đầu tiên nuôi cấy mô sẹo thành công trong thời gian dài từ mô thượng tầng (cambium) ở cà rốt và thuốc lá. Gautheret R. J., C. R. Acad. Sci. (Paris), 208: 118-120; Nobecourt P., C. R. Soc. Biol. (Paris), 130: 1270-1271; White P. R., Am. J. Bot., 26: 59-64. 1941 Overbeek và cs đã sử dụng nước dừa trong nuôi cấy phôi non ở cà rốt. Overbeek Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 8 J. van et al., Science, 94: 350-351. 1942 Gautheret lần đầu tiên theo dõi sự hình thành chất trao đổi thứ cấp trong nuôi cấy mô sẹo thực vật. Gautheret R. J. Bull. Soc. Chim. Biol. 41: 13.. 44 Skoog lần đầu tiên nghiên cứu sự hình thành chồi phụ từ nuôi cấy mô thuốc lá in vitro. Skoog F., Am. J. Bot., 31: 19-24. 1946 Sự tạo cây đầu tiên từ đỉnh chồi ở Lupinus và Tropaeolum. Ball E., Am. J. Bot., 33: 301-318. 1948 Hình thành chồi phụ và rễ ở thuốc lá. Skoog F. and Tsui C., Am. J. Bot., 355: 782-787. 1950 Lần đầu tiên nuôi cấy thành công cây một lá mầm bằng nước dừa. Morel G. C. R. Acad. Sci., 230: 2318-2320. 1951 Nitsch lần đầu tiên nghiên cứu nuôi cấy noãn tách rời in vitro. Nitsch J. P., Am. J. Bot., 38: 566-577. 1951 Skoog nghiên cứu sử dụng các hoá chất điều hoà sinh trưởng và phát sinh cơ quan. Skoog F., Annee Biol., 26: 545-562. 1952 Morel và Martin lần đầu tiên tạo được cây Dahlia sạch virus bằng nuôi cấy đỉnh sinh trưởng. Morel G. and Martin C., C. R. Hebd. Seances Acad. Sci. (Paris), 235: 1324-1325. 1952 Morel và Martin lần đầu tiên thực hiện vi ghép in vitro thành công. Morel G. and Martin C., C. R. Acad. Sci. (Paris), 235: 1324-1325. 1953 Tulecke lần đầu tiên thành công trong nuôi cấy bao phấn và tạo mô sẹo đơn bội từ hạt phấn Ginkgo biloba. Tulecke W. R.., Science, 117: 599-600. 1954 Muir và cs lần đầu tiên tạo được mô sẹo từ mô nuôi dưỡng (nurse culture). Muir W. H. et al., Science, 119: 877-878. 1955 Miller và cs đã phát minh cấu trúc và con đường sinh tổng hợp kinetin. Miller C. et al., J. Am. Chem. Soc., 77: 1392 & 2662-2663. 1957 Skoog và Miller đã khám phá vai trò tỷ lệ nồng độ các chất auxin : cytokinin trong môi trường đối với sự phát sinh cơ quan (rễ hoặc chồi). Skoog F. and Miller C. O., In vitro Symp. Soc. Exp. Biol., No. 11: 118-131. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 9 1957 Vasil nghiên cứu nuôi cấy bao phấn tách rời ở Allium cepa. Vasil I. K., Phytomorph., 7: 138-149. 1958 Maheshwari thực hiện nuôi cấy noãn tách rời in vitro ở cây anh túc Papaver somniferum. Maheshwari N., Science, 127: 342. 58 Maheshwari đã tái sinh thành công phôi soma từ phôi tâm (nucella) trong nuôi cấy noãn Citrus. Maheshwari P. and Rangaswamy N. S., Ind. J. Hort., 15: 275- 281. 1959 Tulecke và Nickell thử nghiệm sản xuất sinh khối thực vật quy mô lớn (134 L) bằng nuôi cấy chìm. Tulecke W. and Nickell L. G., Science, 130: 863-864. 1959 Reinert và Steward lần đầu tiên tạo được phôi vô tính từ nuôi cấy mô cà rốt. 1960 Kanta lần đầu tiên thực hiện thụ tinh trong ống nghiệm ở Papaver rhoeas. Kanta K., Nature, 188: 683-684. 1960 Cocking lần đầu tiên đã sử dụng enzym phân giải thành tế bào để tạo ra số lượng lớn tế bào trần. Cocking E. C., Nature, 187: 927-929. 1960 Morel lần đầu tiên thành công trong nuôi cấy mô đỉnh sinh trưởng để nhân nhanh phong lan. Morel G., Am. Orchid Soc. Bull., 29: 495-497. 1962 Murashige và Skoog phát minh môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật- môi trường MS. Murashige T. and Skoog F., Physiol. Plant., 15: 473-497. 1964 Guha và Maheshwari lần đầu tiên thành công trong tạo được cây đơn bội từ nuôi cấy bao phấn của cây cà rốt. Guha S. and Maheshwari S. C., Nature, 204: 497 and Nature, 212: 97-98 (1966). 1967 Bourgin và Nitsch tạo cây đơn bội từ hạt phấn thuốc lá. Bourgin J. P. and Nitsch J. P., Ann. Physiol. Veg., 9: 377-382 & 10: 69-81. 1969 Phân lập tế bào trần từ nuôi cấy tế bào dịch lỏng (huyền phù) của Hapopappus gracilis. Ericksson T. and Jonassen K., Planta, 89: 85-89 1970 Chon lọc đột biến sinh hoá ở thuốc lá. Carlson P. S., Science, 168: 487-489. 1971 Takebe và cs đã tái sinh được cây từ tế bào trần mô thịt lá ở thuốc lá. Takebe I. et al., Naturewiss., 58: 318-320. 1972 Carlson và cs tạo được cây từ lai xa tế bào trần đầu tiên nhờ dung hợp tế bào trần của 2 loài thuốc lá Nicotiana glauca và N. langsdorfii. Carlson P. S. et al., P. N. A. S. (USA), 69: 2292-2294. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 10 1973 Phát hiện cytokinin có khả năng phá ngủ ở Gerberas. Pierik R. L. M. et al., Sci. Hort., 1: 117-119. 1974 Zaenen và cs phát hiện plasmid Ti đóng vai trò là yếu tố gây u (crown gall) ở cây trồng. Zaenen I. et al., J. Molec. Biol., 86: 109-127; Larebeke N. van et al., Nature, 252: 169-170. 1974 Melchers và Lalib tạo được cây đa bội từ dung hợp tế bào trần đơn bội. Melchers G. and Lalib G., Mol. Gen. Genet. 135: 277-294. 1975 Gengenbach và Green chọn lọc dòng tế bào kháng bệnh nấm Helminthosporium maydis trong nuôi cấy mô sẹo ngô. Gengenbach B. G. and Green C. E., Crop Sci., 15: 645-649. 1977 Chilton và cs chuyển thành công T-DNA vào thực vật. Chilton M. D. et al., Cell, 11: 263-271. 1977 Noguchi và cs nuôi cấy tế bào thuốc lá trong bioreactor 20,000 L. Noguchi M. et al., Plant Tissue Culture & its Biotechnological Application, Springer Verlag, Berlin,: 85-94. 1978 Melchers và cs tạo được cây lai soma cà chua- thuốc lá bằng dung hợp tế bào trần. Melchers G. et al., Carlsburg Res. Comm., 43: 203-218. 1978 Tabata và cs nuôi tế bào thực vật ở quy mô công nghiệp phục vụ sản xuất shikonin (chọn lọc dòng tế bào cho sản lượng các sản phẩm thứ cấp cao hơn). Tabata M. et al., Frontiers of Plant Tissue Culture 1978, Univ. Calgary Press, Calgary,: 213-222. 1979 Marton và cs xây dựng quy trình chuyển gen vào tế bào trần bằng đồng nuôi cấy tế bào và Agrobacterium. Marton L. et al., Nature, 277: 129-131 1980 Alfermann và cs sử dụng các tế bào nuôi cấy trong chuyển hoá sinh học digitoxin thành digoxin. Alfermann A. W. et al., Planta Medica, 40: 218. 1981 Larkin và Scowcroft đưa ra thuật ngữ "biến dị soma" để chỉ các thay đổi di truyền tính trạng xảy ra do nuôi cấy mô và tế bào in vitro. Larkin P. J. and Scowcroft W. R., Theor. Appl. Gen., 60: 197-214. 1982 Krens đã chyển DNA vào tế bào trần. Krens F. A. et al., Nature, 296: 72-74. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 11 1982 Zimmerman sử dụng kỹ thuật xung điện trong dung hợp tế bào trần. Zimmermann U., Biochim. Biophys. Acta, 694: 227-277. 1983 Công ty Mitsui Petrochemicals lần đầu tiên đã sản xuất chất trao đổi thứ cấp trên quy mô công nghiệp bằng nuôi cấy tế bào dịch lỏng Lithospermum spp. Mitsui Petrochemicals. 1983 Zambryski và cs thiết kế các vector chuyển gen thông qua Agrobacterium. Zambryski P. et al., EMBO J., 2: 2143-2150. 1984 Chuyển gen vào tế bào trần thuốc lá Nicotiana bằng ADN plasmid và tái sinh cây chuyển gen. Paszkowski J. et al., EMBO J., 3: 2717-2722. 1985 Fraley và cs thiết kế vector Ti plasmid đã loại bỏ các gen độc gây hại cho việc chuyển gen vào thực vật. Fraley R. T. et al., Bio/Technol., 3: 629-635. 1985 Horsch và cs chuyển gen vào mảnh lá bằng Agrobacterium tumefaciens và tái sinh cây chuyển gen. Horsch R. B. et al., Science, 227: 1229-1231. 1985 An và cs đã phát triển hệ thống hai vector cho chuyển gen thực vật. An G. et al., EMBO J., 4: 277-284. 1985 Chuyển gen vào tế bào trần cây một lá mầm và hai lá mầm bằng phương pháp điện thẩm. Fromm M. E., P. N. A. S. (USA), 82: 5824-5828. 1985 Flores và Filner lần đầu tiên sản xuất chất trao đổi thứ cấp từ nhân nuôi rễ tơ ở Hyoscyamus muticus. Những rễ này sản xuất nhiều hoạt chất hyoscyamine hơn cây tự nhiên. Flores H. E. and Filner P., Primary & Secondary Metabolism of Plant Cell Cultures. Springer Verlag, (Eds. Neumann K. H., Barz W. and Reinhard E.): 174-186. 1986 Crossway và cs chuyển gen vào tế bào trần thuốc lá bằng vi tiêm AND trực tiếp. Crossway A. et al., Mol. Gen. Genet., 202: 179-185. 1987 Klein và cs đã sử dụng súng bắn gen (Particle gun) mang vi đạn trong chuyển gen và tái sinh cây biểu hiện gen chuyển. Klein T. M. et al., Nature, 327: 70-73. 1987 Bytebier và cs lần đầu tiên đã chuyển gen vào cây một lá mầm (Asparagus) bằng Agrobacterium tumefaciens. Bytebier B. et al., P. N. A. S. (USA), 84: 5345- 5349. 1988 Klein và cs tái sinh cây chuyển gen ổn định thông qua phương pháp bắn gen. Klein T. M. et al., P. N. A. S. (USA), 85: 4305-4309. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 12 1991 Sản xuất cây mang gen đầu tiên ở thông Larix decidua bằng chuyển gen qua Agrobacterium rhizogenes. Huang Y. et al., In vitro Cell Dev. Biol., 27: 201- 207. 1992 Lúa kháng chất diệt cỏ nhờ chuyển gen vào tế bào trần thông qua PEG. Dutta S. K. et al., Plant Mol. Biol., 20: 619-629. 1993 Kranz và Lorz thực hiện thụ tinh in vitro tạo ra và nuôi cấy phôi hợp tử ở ngô. Các quá trình phát triển và phân hoá của phôi sau đó đã được quan sát dưới kính hiển vi và phân tích biểu hiện của gen nhằm xác định các gen tham gia trong từng giai đoạn phát triển của phôi. Kranz E. and Lorz H., The Plant Cell, 5: 739- 746. 1994 Thương mại hoá giống cà chua chuyển gen 'Flavr-Savr' 1998 Hamilton và cs đã phát triển vector mang NST nhân tạo của hai vi khuẩn (BBIC) cho chuyển gen thông qua Agrobacterium (khả năng chuyển 150 kb). Hamilton C. M. et al., P. N. A. S. (USA), 93: 9975-9979 1.3 Sơ lược các kỹ thuật dùng trong nuôi cấy mô 1.3.1. Nuôi cấy phôi. Sự ghi nhận đầu tiên về nuôi cấy phôi là công trình của Charles Bonnet ở thế kỷ XVIII. Ông tách phôi Phascolus và Fagopyrum trong trong đất và nhận được cây nhưng là cây lùn. Từ đầu thế kỷ XX các công trình nuôi cấy phôi dần được hoàn thiện hơn. Từ các công trình nghiên cứu trước đó, Knudson (1922) đã nuôi cấy thành công phôi cây lan trong môi trường chứa đường và khám phá ra một điều là nếu thiếu đường thì phôi không thể phát triển thành protocom. Raghavan ( 1976, 7980) đã công bố rằng phôi phát triển qua hai giai đoạn dị dưỡng và tự dưỡng. Ở giai đoạn dị dưỡng ( tiền phôi) cần có các chất điều hoà sinh trưởng để phát triển. Trong giai đoạn tự dưỡng sự phát triển của phôi không cần chất điều hoà sinh trưởng. Đối với nuôi cấy phôi, như đã biết đường đóng vai trò rất quan trọng. Trong nhiều trường hợp thì đường sucrose cho kết qủa tốt hơn các đường khác. Ngoài ra một số chất tự nhiên như nước dừa, nước chiết malt, casein thuỷ phân, là những chất rất cần trong nuôi cấy phôi. Các chất kích thích sinh trưởng như GA3, auxin, cytokinine thường được Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 13 dùng nhiều trong nuôi cấy phôi. Auxin thường dùng ở nồng độ thấp. Kinetin có vai trò đặc biệt cho sự phát triển của phôi. Các yếu tố ngoại cảnh như nhiệt độ, ánh sáng cũng ảnh hưởng đến sự phát triển của phôi nuôi cấy in vitro. Thường phôi nuôi cấy cần nhiệt độ và ánh sáng thấp hơn phôi phát triển tự nhiên. 1.3.2. Nuôi cấy mô và cơ quan tách rời Wetmore (1946) nuôi cấy đỉnh chồi cây nho dại, cùng với một số tác giả khác, ông đã chứng minh các bộ phận của cây đều có thể nuôi cấy khi gặp điều kiện thuận lợi. Lon và Ball (1946) với thí nghiệm nuôi cấy đỉnh chồi cây măng tây đã cho thấy khi nuôi các bộ phận của cây như lá, thân, hoa thì khả năng tạo mô sẹo nhiều hơn. Nhu cầu dinh dưỡng khi nuôi cấy các bộ phận khác nhau của cây là khác nhau nhưng có thể thấy một số yêu cầu chung như nguồn cacbon dưới dạng đường và các muối của các nguyên tố đa lượng ( nito, phospho, kali, calxi) và vi lượng ( Mg, Fe, Mn, Co,Zn,...). Ngoài ra cần một số chất đặc biệt như vitamin (B1, B6, B3, ...) và các chất điều hoà sinh trưởng. Muốn duy trì sinh trưởng và phát triển của cơ quan nuôi cấy cần thường xuyên cấy chuyền qua môi trường mới. Đối với nuôi cấy mô, ngoài những thành phần dinh dưỡng như đối với nuôi cấy cơ quan tách rời, cần bổ sung thêm các chất hữu cơ chứa ít nitơ dưới dạng acide amine, đường và inositol. Trong trường hợp nuôi cấy mô, các chất điều hoà sinh trưởng có vai trò quan trọng hơn vì các mô tách rời không có khử năng tổng hợp các chất này. 1.3.3. Nuôi cấy mô phân sinh Mô phân sinh thường là các mô đỉnh chồi và cành có kích thước 0,1mm÷ 1cm. Các mô phân sinh dùng để nuôi cấy thường tách từ các mầm non, các chồi mới hình thành hoặc các cành non. Đối với nuôi cấy mô phân sinh sự cân bằng giữa các chất điều hoà sinh trưởng rất quan trọng. Muốn kích thích tạo chồi cần bổ sung cytokinine hoặc tổ hợp cytokinine với auxin. Muốn tạo rễ thì bổ sung các auxin như NAA, IAA,... Nuôi cấy mô phân sinh được sử dụng để loại virus tạo cây sạch virus và nhân giống in vitro. Nuôi cấy mô phân sinh còn được sử dụng để nghiên cứu quá trình hình thành cơ quan, tạo cây đa bội qua xử lý colchicin. 1.3.4. Nuôi cấy bao phấn Kỹ thuật nuôi cấy bao phấn đã phát triển và hoàn thiện nhờ công trình nghiên cứu của Bourgin và Nitsch (1967) trên cây thuốc lá, Niizeki và Oono (1968) trên lúa.Từ cuối Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 14 những năm 1970 đã nhận được cây đơn bội từ nuôi cấy bao phấn trên 30 loại cây. Kết quả nghiên cứu của nhiều tác giả cho thấy hạt phấn nuôi cấy có thể phát triển thành cây đơn bội hoàn chỉnh trong điều kiện nuôi cấy in vitro bằng con đường tạo phôi trực tiếp hoặc gián tiếp thông qua tạo mô sẹo và tạo cơ quan. Hình 1.1 Một số kỹ thuật dùng trong nuôi cấy mô tế bào thực vật A. Mô sẹo từ Catharanthus roseus. (B)Nuôi cấy dịch tế bào từ Coryphanta spp. (C) Nốt sần C. roseus. (D) Đầu rễ từ C. roseus. (E)Tái sinh cây từ C. roseus callus. (F) Protoplasts từ Coffea arabica (G) Vi nhân giống của Agave tequilana. (H) Phôi vô tính của cây Coffea canephora. (I) Nuôi cấy rễ cây Psacalium decompositum. 1.3.5. Nuôi cấy tế bào đơn Ngoài khả năng nuôi cấy các cơ quan và mô thực vật, tế bào thực vật có thể được tách và nuôi riêng rẽ trong môi trường phù hợp. Những công trình về nuôi cấy tế bào đơn được tiến hành từ những năm 50 của thế kỷ XX. Tế bào đơn có thể nhận được bằng con đường nghiền mô, hoặc xử lý enzym. Mỗi lọai cây, mỗi loại tế bào khác nhau đòi hỏi những kỹ thuật nuôi cấy khác nhau. Nuôi cấy tế bào đơn được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc tế bào, nghiên cứu ảnh hưởng của các điều kiện khác nhau lên các quá trình sinh trưởng, phát triển và phân hoá của tế bào. Nuôi cấy tế bào đơn còn được sử dụng trong chọn dòng tế bào. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 15 1.3.6. Nuôi cấy protoplast Nuôi cấy protoplats được phát triển nhờ công trình của Cocking (1960). Ông là người đầu tiên dùng enzym để thuỷ phân thành tế bào và tách được protoplast từ tế bào rễ cà chua. Trong điều kiện nuôi cấy phù hợp protoplast có thể tái sinh thành tế bào mới, phân chia và tái sinh thành cây hoàn chỉnh. Do không có thành tế bào nên protoplast trở nên một đối tượng lý tưởng trong nghiên cứu biến đổi di truyền ở thực vật. Bằng phương pháp dung hợp hai protoplast có thể tạo ra các cây lai soma. Ngoài ra còn có thể sử dụng kỹ thuật dung hợp protoplast để chuyển các bào quan và chuyển gene. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD
-
Nuôi cấy tế bào thực vật
32 p | 1279 | 442
-
Chủ đề: Nuôi cấy Mô - Tế bào thực vật bằng tế bào Trần và kỹ thuật chuyển Gen
70 p | 956 | 393
-
Giáo trình: Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vât
357 p | 748 | 371
-
NUÔI CẤY MÔ – TẾ BÀO THỰC VẬT
12 p | 1041 | 285
-
Tiểu luận: Nuôi cấy mô, tế bào thực vật
22 p | 549 | 230
-
Nuôi cấy mô tế bào thực vật học -Nghiên cứu và ứng dụng
186 p | 323 | 138
-
Đề cương nuôi cấy mô tế bào
20 p | 256 | 114
-
Báo cáo: Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật
28 p | 257 | 112
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 6
28 p | 206 | 112
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 3
28 p | 215 | 111
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 2
9 p | 234 | 109
-
Giáo trình Nuôi cấy mô tế bào thực vật
356 p | 146 | 99
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 8
16 p | 136 | 82
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 7
25 p | 163 | 79
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Phần 2 chương 1
10 p | 85 | 46
-
qqqBài giảng: Nuôi cấy mô - Tế bào thực vật bằng tế bào trần và kỹ thuật chuyển gen
70 p | 76 | 33
-
Đề tài: Nuôi cấy mô và tế bào thực vật
19 p | 2 | 0

markdown:
# Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 1
Chia sẻ: Doc Tai | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:15
![](images/blank.gif)
![](images/blank.gif)
lượt xem 125
download
![](http://image1.tailieu.vn/document/thumbnail/2011/20110830/biodoc/80x100/cncaymo_c1_6777.jpg)
##
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 1
[Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ](javascript:void(0);)
Download
![](images/down16x21.png)
MỞ ĐẦU Công nghệ sinh học là sự ứng dụng tổng hợp của sinh hóa học, vi sinh vật học và các khoa học về công nghệ để đạt đến sự ứng dụng công nghiệp các năng lực của vi sinh vật, của các tế bào, các tổ chức nuôi cấy và các thành phần của chúng. Công nghệ sinh học như một thân cây mà những rễ chính của cây này là vi sinh vật học, di truyền học, sinh hóa học, điện tử học, nông học, công nghệ học…và trên vòm lá với hàng nghìn quả đó là các...
![](images/graphics/blank.gif)
Bình luận(0)
[Đăng nhập để gửi bình luận!](javascript:void(0);)
##
Nội dung Text: Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 1
- 1 MỞ ĐẦU Công nghệ sinh học là sự ứng dụng tổng hợp của sinh hóa học, vi sinh vật học và các khoa học về công nghệ để đạt đến sự ứng dụng công nghiệp các năng lực của vi sinh vật, của các tế bào, các tổ chức nuôi cấy và các thành phần của chúng. Công nghệ sinh học như một thân cây mà những rễ chính của cây này là vi sinh vật học, di truyền học, sinh hóa học, điện tử học, nông học, công nghệ học…và trên vòm lá với hàng nghìn quả đó là các loại sản phẩm phục vụ trồng trọt, chăn nuôi, y học, năng lượng mới, vật liệu mới, tuyển khoáng, bảo vệ môi trường... Nhờ ứng dụng các thành tựu mới mẻ của công nghệ sinh học như kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào, kỹ thuật tái tổ hợp di truyền, người ta có thể tạo ra được những giống cây trồng không những có năng suất cao mà còn chống chịu được với sâu bệnh, hạn hán và điều kiện nghèo phân bón. Nhờ bỏ qua được việc lai chéo và khắc phục được sự tương khắc sinh sản mà việc lai tạo giống rút ngắn được nhiều thời gian. Kỹ thuật tái tổ hợp AND và các kỹ thuật in vitro mở ra khả năng lai khác loài và làm tăng nhanh tính đa dạng di truyền. Đối với các loại cây trồng có giá trị thương mại lớn, kỹ thuật nuôi cấy mô đã đem lại những hiệu quả kinh tế hết sức rõ rệt. Hiện nay, người ta đã bắt đầu ứng dụng khả năng nuôi cấy tế bào thực vật tách rời ở qui mô công nghiệp để thu nhận các sản phẩm, các hoạt chất sinh học có giá trị kinh tế cao. Nuôi cấy mô tế bào thực vật là một ngành khoa học trẻ có nhiều triển vọng, được ứng dụng nhiều trong các lĩnh vực kinh tế. Ý thức được triển vọng to lớn của ngành khoa học hiện đại này, chúng tôi xin giới thiệu quyển sách công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật nhằm phục vụ sinh viên, học viên sau đại học và các cơ quan có liên quan . Nội dung cuốn sách bao hàm toàn bộ những vấn đề cơ bản trong nội dung công nghệ nuôi cấy mô thực vật. Chúng tôi xin cảm ơn GS. Trần Văn Minh đã cung cấp cho chúng tôi nhiều tài liệu chính để biên soạn. Chúng tôi chân thành cảm ơn nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật và ban biên tập cho xuất bản để cuốn sách được sớm đến với bạn đọc. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 2 Phần 1. NUÔI CẤY TẾ BÀO Chương 1. GIỚI THIỆU CHUNG VÀ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN 1.1. Giới thiệu chung Khái niệm biotechnology - công nghệ sinh học đã được đề xuất năm 1917 bởi một kỹ sư người Hungari tên là Karl Erky để mô tả quá trình chế biến củ cải đỏ làm nguồn thức ăn phục vụ sản xuất lợn với qui mô lớn. Theo Karl Erky, Biotechnology là từ dùng để chỉ "Tất cả những công việc trong đó các sản phẩm được sản xuất ra từ các nguyên liệu thô với sự giúp đỡ của các vật chất sống". Năm 1961 một nhà vi sinh vật học người Thuỵ Điển là Carl Goren Hedén đề nghị đổi tên tạp chí khoa học Journal of microbiological and Biochemical Engineering and technology thành Biotechnology and Bioengineering để đăng tải các nghiên cứu trong lĩnh vực vi sinh học ứng dụng và lên men công nghiệp. Từ đó, Biotechnology đã trở nên rõ ràng và luôn gắn liền với những nghiên cứu về "sự sản xuất công nghiệp các loại hàng hoá và dịch vụ thông qua các quá trình có sử dụng các cơ thể, hệ thống sinh học và chế biến". Các nghiên cứu về công nghệ sinh học đã được phát triển dựa trên các lĩnh vực chuyên môn như vi sinh, hoá sinh và công nghệ hóa học. Công nghệ sinh học theo W.H Stone (1987) có thể định nghĩa: “Là những công nghệ sử dụng các cơ thể sống hoặc các phần của cơ thể như tế bào, để tạo ra hoặc thay đổi các sản phẩm nhằm cải tiến các cây trồng và vật nuôi, hoặc phát triển các vi sinh vật vào các ứng dụng đặc hiệu”. Theo liên đoàn công nghệ sinh học châu Âu (EFB): “Công nghệ sinh học là ứng dụng tổng hợp của sinh hoá học, vi sinh vật và các khoa học về công nghệ để đạt tới sự ứng dụng công nghiệp các năng lực của vi sinh vật, của các tế bào, các tổ chức nuôi cấy và các thành phần của chúng.” Đến nay, định nghĩa về công nghệ sinh học được nhiều nhà khoa học cũng như nhiều nước trên thế giới thống nhất như sau: Công nghệ sinh học là các quá trình sản xuất ở quy mô công nghiệp có sự tham gia của các tác nhân sinh học (ở mức độ cơ thể, tế bào hoặc dưới tế bào) dựa trên các thành tựu tổng hợp của nhiều bộ môn khoa học, phục vụ cho việc tăng của cải vật chất của xã hội và bảo vệ lợi ích của con người. Theo quan điểm hiện đại, các tác nhân sinh học tham gia vào quá trình sản xuất ở trên là những giống sinh vật mới hoặc các sản phẩm của chúng được tạo ra bằng kỹ thuật di truyền hiện đại (công nghệ gen). Từ định nghĩa cô đọng này có thể thấy: + Công nghệ sinh học không phải là một bộ môn khoa học như toán, lý, hoá, sinh học phân tử... mà là một phạm trù sản xuất. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 3 + Công nghệ sinh học không chỉ tạo ra thêm của cải vật chất, mà còn hướng vào việc bảo vệ và tăng cường chất lượng cuộc sống con người. + Thực tế, công nghệ sinh học mang tính ứng dụng, tuy nhiên hàng loạt kỹ thuật của công nghệ sinh học đang là những công cụ sắc bén để nghiên cứu khoa học sinh học và làm sáng tỏ các cơ chế của các hiện tượng sống ở mức phân tử. ở nước ta, theo Nghị định số 18/CP của Chính phủ ngày 11/3/1994 về phát triển công nghệ sinh học thì: “Công nghệ sinh học là một tập hợp các ngành khoa học (sinh học phân tử, di truyền học, vi sinh vật học, sinh hóa học và công nghệ học) nhằm tạo ra các công nghệ khai thác ở quy mô công nghiệp các hoạt động sống của vi sinh vật, tế bào thực vật và động vật.” - Khái niệm về công nghệ sinh học nông nghiệp (Agriculture Biotechnology) Theo Nghị định số 18/CP của Chính phủ ngày 11/3/1994 về phát triển công nghệ sinh học ở Việt nam thì: “Công nghệ sinh học là một tập hợp các ngành khoa học (sinh học phân tử, di truyền học, vi sinh vật học, sinh hóa học và công nghệ học) nhằm tạo ra các công nghệ khai thác ở quy mô công nghiệp các hoạt động sống của vi sinh vật, tế bào thực vật và động vật.” Vậy, “Công nghệ sinh học nông nghiệp là một tập hợp các ngành khoa học (sinh học phân tử, di truyền học, vi sinh vật học, sinh hoá học và công nghệ học) nhằm tạo ra các công nghệ sản xuất sản phẩm nông nghiệp ở quy mô công nghiệp.” Chúng ta có thể hiểu, công nghệ sinh học nông nghiệp là một nhánh của công nghệ sinh học mà đối tượng phục vụ là sản xuất nông nghiệp; cụ thể là ứng dụng các thành tựu chung của công nghệ sinh học để phục vụ cho sản xuất nông nghiệp của con người Dựa vào việc ứng dụng thành tựu của công nghệ sinh học để phục vụ các chuyên ngành khác nhau trong sản xuất nông nghiệp mà người ta có thể chia công nghệ sinh học nông nghiệp thành 2 loại sau: - Công nghệ sinh học trong trồng trọt (bao gồm cả trồng cây lâm nghiệp, cây dược liệu) gồm nuôi cấy mô tế bào thực vật, nuôi cấy hạt phấn, chuyển gen vào tế bào thực vật chủ... - Công nghệ sinh học trong chăn nuôi (bao gồm cả chăn nuôi thuỷ sản) gồm nuôi cấy mô tế bào động vật, sản xuất tế bào gốc, cấy chuyển phôi, nhân bản vô tính... Hiện nay, từ những thành tựu của công nghệ sinh học trong nuôi cấy mô tế bào, nuôi cấy hạt phấn và chuyển gen có thể ứng dụng rất nhiều vào lĩnh vực trồng trọt, như: - Nhân nhanh vô tính các giống cây quý: từ một mẫu nuôi cấy người ta có thể tạo ra hàng triệu cây con như nhau nếu đủ thời gian cấy chuyển. Tuy nhiên, hệ số cấy chuyển phụ thuộc tuỳ giống, càng cấy chuyển nhiều lần càng tạo nhiều biến dị. Ví dụ, các nhà khoa học đã kết luận từ một chồi dứa đưa vào nuôi cấy trong ống nghiệm có thể nhân ra hàng triệu cây dứa giống; từ một chồi chuối đưa vào nuôi cấy có thể nhân ra 2.000 cây Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 4 chuối giống, nếu qua số này sẽ có tỷ lệ biến dị cao. - Cải lương giống cây trồng bằng nuôi cấy đỉnh sinh trưởng (meristerm): để phục tráng những giống cây quý đã nhiễm virus người ta có thể nuôi cấy đỉnh sinh trưởng để nhân nhanh. Qua một số lần nuôi cấy theo kiểu này sẽ tạo ra được những cây hoàn toàn sạch bệnh từ cây đã nhiễm virus. - Tạo dòng đơn bội từ nuôi cấy bao phấn và nuôi cấy tế bào hạt phấn: Người ta đã ứng dụng kĩ thuật nuôi cấy bao phấn và hạt phấn để tạo những cây đơn bội từ bao phấn hoặc hạt phấn, sau đó lưỡng bội hoá và tạo thành dòng đồng hợp tử. Kĩ thuật này đã thành công nhiều ở những cây họ cà. - Khắc phục lai xa bằng cách thụ phấn trong ống nghiệm nhờ kĩ thuật nuôi cấy phôi: Nhờ nuôi cấy trong ống nghiệm đã khắc phục tính bất hợp giao tử trước và sau khi thụ tinh đối với lai giữa các cây khác nhau khá xa về mặt di truyền. - Lai vô tính còn gọi là dung nạp tế bào trần (Protoplast): Nhờ kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật mà người ta đã tạo thành cây lai từ 2 giống khác nhau khá xa về mặt di truyền bằng cách dùng các enzim để hoà tan màng tế bào rồi cho các tế bào trần (không còn màng) vào nuôi cấy chung trong môi trường nhân tạo và chúng phát triển thành khối mô sẹo (callus), từ đó chuyển khối callus này sang các môi trường phân hoá chức năng tế bào và để nuôi cấy thành cây lai. - Tạo giống cây trồng mới bằng kĩ thuật chuyển gen: Trên cơ sở xác định được tính trạng quý mà gen quy định, người ta có thể chuyển những gen đó vào những cây trồng khác với mong muốn tạo được những giống mới mang đặc tính mong muốn. 1.2. Sơ lược lịch sử phát triển Năm 1665, Robert Hooke quan sát thấy tế bào sống dưới kính hiển vi và đưa ra khái niệm "tế bào - Cell". Anton Van Leuwen Hoek (1632-1723) thiết kế kính hiển vi khuyếch đại được 270 lần, lần đầu tiên quan sát thấy vi khuẩn, tế bào tinh trùng trong tinh dịch người và động vật. Năm 1838, Matthias Schleiden và Theodore Schwann đề xướng học thuyết cơ bản của sinh học gọi là Học thuyết tế bào: + Mọi cơ thể sống được cấu tạo bởi một hoặc nhiều tế bào. + Tế bào là đơn vị cấu trúc và chức năng cơ bản của cơ thể sống, là hình thức nhỏ nhất của sự sống. + Tế bào chỉ được tạo ra từ tế bào tồn tại trước đó. Năm 1875, Oscar Hertwig chứng minh bằng quan sát trên kính hiển vi rằng sự thụ thai là do sự hợp nhất của nhân tinh trùng và nhân trứng. Sau đó, Hermann P., Schneider F.A và Butschli O. đã mô tả chính xác quá trình phân chia tế bào. Năm 1883, Wilhelm Roux lần đầu tiên lý giải về phân bào giảm nhiễm ở cơ quan sinh dục. Từ một tế bào thực vật nuôi cấy in vitro có thể tái sinh thành một cơ thể sống hoàn chỉnh. Khả năng này của Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 5 tế bào thực vật được gọi là tính toàn năng. Năm 1902, Haberlandt lần đầu tiên thí nghiệm nuôi cấy mô cây một lá mầm nhưng không thành công. Năm 1934, Kogl lần đầu tiên xác định được vai trò của IAA, 1 hoocmon thực vật đầu tiên thuộc nhóm auxin có khả năng kích thích sự tăng trưởng và phân chia tế bào. Năm 1939, ba nhà khoa học Gautheret, Nobecourt và White đã đồng thời nuôi cấy mô sẹo thành công trong thời gian dài từ mô thượng tầng (cambium) ở cà rốt và thuốc lá, mô sẹo có khả năng sinh trưởng liên tục. Năm 1941, Overbeek và cs đã sử dụng nước dừa trong nuôi cấy phôi non ở cây cà rốt Datura. Năm 1955, Miller và cs đã phát minh cấu trúc và sinh tổng hợp của kinetin - một cytokinin đóng vai trò quan trọng trong phân bào và phân hoá chồi ở mô nuôi cấy. Đến năm 1957, Skoog và Miller đã khám phá vai trò của tỷ lệ nồng độ các chất auxin: cytokinin trong môi trường đối với sự phát sinh cơ quan (rễ hoặc chồi). Khi tỷ lệ auxin/ cytokinin (ví dụ: nồng độ IAA/ nồng độ kinetin) nhỏ hơn 1 và càng nhỏ, mô có xu hướng tạo chồi. Ngược lại khi nồng độ IAA/ nồng độ kinetin lớn hơn 1 và càng lớn, mô có xu hướng tạo rễ. Tỷ lệ nồng độ auxin và cytokinin thích hợp sẽ kích thích phân hoá cả chồi và rễ, tạo cây hoàn chỉnh. Năm 1949, Limmasets và Cornuet đã phát hiện rằng virus phân bố không đồng nhất trên cây và thường không thấy có virus ở vùng đỉnh sinh trưởng. Năm 1952, Morel và Martin đã tạo ra cây sạch bệnh virus của 6 giống khoai tây từ nuôi cấy đỉnh sinh trưởng. Ngày nay, kỹ thuật này với một số cải tiến đã trở thành phương pháp loại trừ bệnh virus được dùng rộng rãi đối với nhiều loài cây trồng khác nhau. Năm 1952, Morel và Martin lần đầu tiên thực hiện vi ghép in vitro thành công. Kỹ thuật vi ghép sau đó đã được ứng dụng rộng rãi trong tạo nguồn giống sạch bệnh virus và tương tự virus ở nhiều cây trồng nhân giống bằng phương pháp vô tính khác nhau, đặc biệt là tạo giống cây ăn quả sạch bệnh. Năm 1960, Morel đã thực hiện bước ngoặt cách mạng trong sử dụng kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng trong nhân nhanh các loại địa lan Cymbidium, mở đầu công nghiệp vi nhân giống thực vật. Năm 1960, Cocking lần đầu tiên sử dụng enzym phân giải thành tế bào và đã tạo ra số lượng lớn tế bào trần. Kỹ thuật này sau đó đã được hoàn thiện để tách nuôi tế bào trần ở nhiều cây trồng khác nhau. Năm 1971, Takebe và cs đã tái sinh được cây từ tế bào trần mô thịt lá (mesophill cell) ở thuốc lá. Năm 1972, Carlson và cs lần đầu tiên thực hiện lai tế bào sôma giữa các loài, tạo được cây từ dung hợp tế bào trần của 2 loài thuốc lá Nicotiana glauca và N. langsdorfii. Năm 1978, Melchers và cs tạo được cây lai soma "Cà chua Thuốc lá" bằng lai xa tế bào trần của 2 cây này. Đến nay, việc tái sinh cây hoàn chỉnh từ tế bào trần hoặc từ lai tế bào trần đã thành công ở nhiều loài thực vật. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 6 Năm 1964, Guha và Maheshwari lần đầu tiên thành công trong tạo được cây đơn bội từ nuôi cấy bao phấn của cây cà Datura. Kỹ thuật này sau đó đã được nhiều tác giả phát triển và ứng dụng rộng rãi trong tạo dòng đơn bội (1x), dòng thuần nhị bội kép (2x), cố định ưu thế lai (nuôi cấy bao phấn hoặc hạt phấn của dòng lai F1 để tạo giống thuần mang tính trạng ưu thế lai). Năm 1959, Tulecke và Nickell đã thử nghiệm sản xuất sinh khối mô thực vật quy mô lớn (134 lít) bằng nuôi cấy chìm. Năm 1977, Noguchi và cs đã nuôi cấy tế bào thuốc lá trong bioreactor dung tích lớn 20,000 lít. Năm 1978, Tabata và cs đã nuôi tế bào cây thuốc ở quy mô công nghiệp phục vụ sản xuất shikonin. Họ đã chọn lọc được dòng tế bào cho sản lượng các sản phẩm thứ cấp (shikonin) cao hơn. Năm 1985, Flores và Filner lần đầu tiên sản xuất chất trao đổi thứ cấp từ nhân nuôi rễ tơ ở Hyoscyamus muticus. Những rễ này sản xuất nhiều hoạt chất hyoscyamine hơn cây tự nhiên. Hiện nay, công nghệ nuôi cấy tế bào và mô (ví dụ, mô rễ của nhân sâm) trong các bioreactor dung tích lớn đã được thương mại hoá ở mức công nghiệp để sản xuất sinh dược. Năm 1981, trên cơ sở quan sát các biến dị xảy ra rất phổ biến trong nuôi cấy mô và tế bào với phổ biến dị và tần số biến dị cao, Larkin và Scowcroft đã đưa ra thuật ngữ "biến dị dòng soma" (Somaclonal Variation) để chỉ các thay đổi di truyền tính trạng xảy ra do nuôi cấy mô và tế bào in vitro. Từ các dòng tế bào hoặc cây biến dị di truyền ổn định có thể nhân nhanh, tạo ra các dòng và giống đột biến có năng suất, hàm lượng hoạt chất hữu ích cao, kháng một số các điều kiện bất lợi như bệnh, mặn, hạn,… Đến nay các nhà khoa học đã khẳng định rằng mức độ thành công của chuyển gen vào cây trồng phụ thuộc rất nhiều vào hệ thống nuôi cấy và tái sinh tế bào thành cây in vitro sau chuyển gen. Năm 1974, Zaenen và cs đã phát hiện plasmid Ti đóng vai trò là yếu tố gây u (crown gall) ở cây trồng. Năm 1977, Chilton và cs đã chuyển thành công T- DNA vào thực vật. Năm 1979, Marton và cs đã xây dựng quy trình chuyển gen vào tế bào trần bằng đồng nuôi cấy tế bào trần và Agrobacterium. Năm 1982, Krens đã chyển thành công DNA vào tế bào trần. Năm 1985, Fraley và cs thiết kế vector plasmid Ti đã loại bỏ các gen độc gây hại để sử dụng cho việc thiết kế vector chuyển gen vào thực vật. Cùng trong năm, Horsch và cs đã chuyển gen vào mảnh lá bằng Agrobacterium tumefaciens và tái sinh cây chuyển gen. An và cs (1985) đã phát triển hệ thống hai vector cho chuyển gen thực vật. Năm 1987, Klein và cs đã sử dụng súng bắn gen (particle gun) mang vi đạn trong chuyển gen và tái sinh được cây biểu hiện gen chuyển. Năm 1994, thương mại hoá giống cà chua chuyển gen 'FlavrSavr' Các bước phát triểntrong lịch sử công nghệ tế bào thực vật được tóm tắt ở bảng 1.1. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 7 Bảng 1.1. Những mốc chính trong lịch sử phát triển của công nghệ tế bào thực vật Năm Những phát minh và sự kiện quan trọng 1665 Robert Hooke quan sát được tế bào sống dưới kính hiển vi và đưa ra khái niệm tế bào. 1838 Matthias Schleiden và Theodore Schwann đề xướng học thuyết tế bào. Schleiden M. J., Arch. Anat., Physiol. U. wiss. Med. (J. Muller), 1838: 137-176; Schwann T., W. Engelman, No. 176 (1910). 1902 Haberlandt lần đầu tiên thí nghiệm nuôi cấy mô cây một lá mầm nhưng không thành công. Haberlandt G., Sitzungsber Akad. Wiss. Wien, Math.-Naturwiss. Kl., 111: 69-92. 1904 Hannig tiến hành các thí nghiệm nuôi cấy phôi đầu tiên ở các loài họ cải Crucifers. Hannig B., Bot. Zeitung, 62: 45-80. 1922 Cho hạt phong lan nảy mầm in vitro. Knudson L., Bot. Gaz., 73: 1-25. 1924 Hình thành callus từ rễ cà rốt trong môi trường có acid lactic. Blumenthal F. and Meyer P. Z. Krebsforsch. 21: 250-252. 1925 Làm hạt phong lan nảy mầm in vitro. Knudson L., Bot. Gaz., 29: 345-379. 1929 Laibach sử dụng nuôi cấy phôi để khắc phục hiện tượng bất hoà hợp khi lai ở Linum spp. Laibach F., J Hered., 20: 201-208. 1934 White đã thành công khi nuôi cấy mô rễ cà chua trong thời gian dài. White P. R., Plant Physiol., 9: 585-600. 1934 Kogl lần đầu tiên xác định được vai trò của IAA, 1 hoocmon thực vật đầu tiên có khả năng kích thích sự tăng trưởng và phân chia tế bào. Kogl F. et al., Z. Physiol. Chem., 228: 90-103. 1936 Nuôi cấy phôi các loài cây hạt trần khác nhau. LaRue C. R., Bull. Torrey Bot. Club, 63: 365-382 1939 Gautheret, Nobecourt và White lần đầu tiên nuôi cấy mô sẹo thành công trong thời gian dài từ mô thượng tầng (cambium) ở cà rốt và thuốc lá. Gautheret R. J., C. R. Acad. Sci. (Paris), 208: 118-120; Nobecourt P., C. R. Soc. Biol. (Paris), 130: 1270-1271; White P. R., Am. J. Bot., 26: 59-64. 1941 Overbeek và cs đã sử dụng nước dừa trong nuôi cấy phôi non ở cà rốt. Overbeek Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 8 J. van et al., Science, 94: 350-351. 1942 Gautheret lần đầu tiên theo dõi sự hình thành chất trao đổi thứ cấp trong nuôi cấy mô sẹo thực vật. Gautheret R. J. Bull. Soc. Chim. Biol. 41: 13.. 44 Skoog lần đầu tiên nghiên cứu sự hình thành chồi phụ từ nuôi cấy mô thuốc lá in vitro. Skoog F., Am. J. Bot., 31: 19-24. 1946 Sự tạo cây đầu tiên từ đỉnh chồi ở Lupinus và Tropaeolum. Ball E., Am. J. Bot., 33: 301-318. 1948 Hình thành chồi phụ và rễ ở thuốc lá. Skoog F. and Tsui C., Am. J. Bot., 355: 782-787. 1950 Lần đầu tiên nuôi cấy thành công cây một lá mầm bằng nước dừa. Morel G. C. R. Acad. Sci., 230: 2318-2320. 1951 Nitsch lần đầu tiên nghiên cứu nuôi cấy noãn tách rời in vitro. Nitsch J. P., Am. J. Bot., 38: 566-577. 1951 Skoog nghiên cứu sử dụng các hoá chất điều hoà sinh trưởng và phát sinh cơ quan. Skoog F., Annee Biol., 26: 545-562. 1952 Morel và Martin lần đầu tiên tạo được cây Dahlia sạch virus bằng nuôi cấy đỉnh sinh trưởng. Morel G. and Martin C., C. R. Hebd. Seances Acad. Sci. (Paris), 235: 1324-1325. 1952 Morel và Martin lần đầu tiên thực hiện vi ghép in vitro thành công. Morel G. and Martin C., C. R. Acad. Sci. (Paris), 235: 1324-1325. 1953 Tulecke lần đầu tiên thành công trong nuôi cấy bao phấn và tạo mô sẹo đơn bội từ hạt phấn Ginkgo biloba. Tulecke W. R.., Science, 117: 599-600. 1954 Muir và cs lần đầu tiên tạo được mô sẹo từ mô nuôi dưỡng (nurse culture). Muir W. H. et al., Science, 119: 877-878. 1955 Miller và cs đã phát minh cấu trúc và con đường sinh tổng hợp kinetin. Miller C. et al., J. Am. Chem. Soc., 77: 1392 & 2662-2663. 1957 Skoog và Miller đã khám phá vai trò tỷ lệ nồng độ các chất auxin : cytokinin trong môi trường đối với sự phát sinh cơ quan (rễ hoặc chồi). Skoog F. and Miller C. O., In vitro Symp. Soc. Exp. Biol., No. 11: 118-131. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 9 1957 Vasil nghiên cứu nuôi cấy bao phấn tách rời ở Allium cepa. Vasil I. K., Phytomorph., 7: 138-149. 1958 Maheshwari thực hiện nuôi cấy noãn tách rời in vitro ở cây anh túc Papaver somniferum. Maheshwari N., Science, 127: 342. 58 Maheshwari đã tái sinh thành công phôi soma từ phôi tâm (nucella) trong nuôi cấy noãn Citrus. Maheshwari P. and Rangaswamy N. S., Ind. J. Hort., 15: 275- 281. 1959 Tulecke và Nickell thử nghiệm sản xuất sinh khối thực vật quy mô lớn (134 L) bằng nuôi cấy chìm. Tulecke W. and Nickell L. G., Science, 130: 863-864. 1959 Reinert và Steward lần đầu tiên tạo được phôi vô tính từ nuôi cấy mô cà rốt. 1960 Kanta lần đầu tiên thực hiện thụ tinh trong ống nghiệm ở Papaver rhoeas. Kanta K., Nature, 188: 683-684. 1960 Cocking lần đầu tiên đã sử dụng enzym phân giải thành tế bào để tạo ra số lượng lớn tế bào trần. Cocking E. C., Nature, 187: 927-929. 1960 Morel lần đầu tiên thành công trong nuôi cấy mô đỉnh sinh trưởng để nhân nhanh phong lan. Morel G., Am. Orchid Soc. Bull., 29: 495-497. 1962 Murashige và Skoog phát minh môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật- môi trường MS. Murashige T. and Skoog F., Physiol. Plant., 15: 473-497. 1964 Guha và Maheshwari lần đầu tiên thành công trong tạo được cây đơn bội từ nuôi cấy bao phấn của cây cà rốt. Guha S. and Maheshwari S. C., Nature, 204: 497 and Nature, 212: 97-98 (1966). 1967 Bourgin và Nitsch tạo cây đơn bội từ hạt phấn thuốc lá. Bourgin J. P. and Nitsch J. P., Ann. Physiol. Veg., 9: 377-382 & 10: 69-81. 1969 Phân lập tế bào trần từ nuôi cấy tế bào dịch lỏng (huyền phù) của Hapopappus gracilis. Ericksson T. and Jonassen K., Planta, 89: 85-89 1970 Chon lọc đột biến sinh hoá ở thuốc lá. Carlson P. S., Science, 168: 487-489. 1971 Takebe và cs đã tái sinh được cây từ tế bào trần mô thịt lá ở thuốc lá. Takebe I. et al., Naturewiss., 58: 318-320. 1972 Carlson và cs tạo được cây từ lai xa tế bào trần đầu tiên nhờ dung hợp tế bào trần của 2 loài thuốc lá Nicotiana glauca và N. langsdorfii. Carlson P. S. et al., P. N. A. S. (USA), 69: 2292-2294. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 10 1973 Phát hiện cytokinin có khả năng phá ngủ ở Gerberas. Pierik R. L. M. et al., Sci. Hort., 1: 117-119. 1974 Zaenen và cs phát hiện plasmid Ti đóng vai trò là yếu tố gây u (crown gall) ở cây trồng. Zaenen I. et al., J. Molec. Biol., 86: 109-127; Larebeke N. van et al., Nature, 252: 169-170. 1974 Melchers và Lalib tạo được cây đa bội từ dung hợp tế bào trần đơn bội. Melchers G. and Lalib G., Mol. Gen. Genet. 135: 277-294. 1975 Gengenbach và Green chọn lọc dòng tế bào kháng bệnh nấm Helminthosporium maydis trong nuôi cấy mô sẹo ngô. Gengenbach B. G. and Green C. E., Crop Sci., 15: 645-649. 1977 Chilton và cs chuyển thành công T-DNA vào thực vật. Chilton M. D. et al., Cell, 11: 263-271. 1977 Noguchi và cs nuôi cấy tế bào thuốc lá trong bioreactor 20,000 L. Noguchi M. et al., Plant Tissue Culture & its Biotechnological Application, Springer Verlag, Berlin,: 85-94. 1978 Melchers và cs tạo được cây lai soma cà chua- thuốc lá bằng dung hợp tế bào trần. Melchers G. et al., Carlsburg Res. Comm., 43: 203-218. 1978 Tabata và cs nuôi tế bào thực vật ở quy mô công nghiệp phục vụ sản xuất shikonin (chọn lọc dòng tế bào cho sản lượng các sản phẩm thứ cấp cao hơn). Tabata M. et al., Frontiers of Plant Tissue Culture 1978, Univ. Calgary Press, Calgary,: 213-222. 1979 Marton và cs xây dựng quy trình chuyển gen vào tế bào trần bằng đồng nuôi cấy tế bào và Agrobacterium. Marton L. et al., Nature, 277: 129-131 1980 Alfermann và cs sử dụng các tế bào nuôi cấy trong chuyển hoá sinh học digitoxin thành digoxin. Alfermann A. W. et al., Planta Medica, 40: 218. 1981 Larkin và Scowcroft đưa ra thuật ngữ "biến dị soma" để chỉ các thay đổi di truyền tính trạng xảy ra do nuôi cấy mô và tế bào in vitro. Larkin P. J. and Scowcroft W. R., Theor. Appl. Gen., 60: 197-214. 1982 Krens đã chyển DNA vào tế bào trần. Krens F. A. et al., Nature, 296: 72-74. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 11 1982 Zimmerman sử dụng kỹ thuật xung điện trong dung hợp tế bào trần. Zimmermann U., Biochim. Biophys. Acta, 694: 227-277. 1983 Công ty Mitsui Petrochemicals lần đầu tiên đã sản xuất chất trao đổi thứ cấp trên quy mô công nghiệp bằng nuôi cấy tế bào dịch lỏng Lithospermum spp. Mitsui Petrochemicals. 1983 Zambryski và cs thiết kế các vector chuyển gen thông qua Agrobacterium. Zambryski P. et al., EMBO J., 2: 2143-2150. 1984 Chuyển gen vào tế bào trần thuốc lá Nicotiana bằng ADN plasmid và tái sinh cây chuyển gen. Paszkowski J. et al., EMBO J., 3: 2717-2722. 1985 Fraley và cs thiết kế vector Ti plasmid đã loại bỏ các gen độc gây hại cho việc chuyển gen vào thực vật. Fraley R. T. et al., Bio/Technol., 3: 629-635. 1985 Horsch và cs chuyển gen vào mảnh lá bằng Agrobacterium tumefaciens và tái sinh cây chuyển gen. Horsch R. B. et al., Science, 227: 1229-1231. 1985 An và cs đã phát triển hệ thống hai vector cho chuyển gen thực vật. An G. et al., EMBO J., 4: 277-284. 1985 Chuyển gen vào tế bào trần cây một lá mầm và hai lá mầm bằng phương pháp điện thẩm. Fromm M. E., P. N. A. S. (USA), 82: 5824-5828. 1985 Flores và Filner lần đầu tiên sản xuất chất trao đổi thứ cấp từ nhân nuôi rễ tơ ở Hyoscyamus muticus. Những rễ này sản xuất nhiều hoạt chất hyoscyamine hơn cây tự nhiên. Flores H. E. and Filner P., Primary & Secondary Metabolism of Plant Cell Cultures. Springer Verlag, (Eds. Neumann K. H., Barz W. and Reinhard E.): 174-186. 1986 Crossway và cs chuyển gen vào tế bào trần thuốc lá bằng vi tiêm AND trực tiếp. Crossway A. et al., Mol. Gen. Genet., 202: 179-185. 1987 Klein và cs đã sử dụng súng bắn gen (Particle gun) mang vi đạn trong chuyển gen và tái sinh cây biểu hiện gen chuyển. Klein T. M. et al., Nature, 327: 70-73. 1987 Bytebier và cs lần đầu tiên đã chuyển gen vào cây một lá mầm (Asparagus) bằng Agrobacterium tumefaciens. Bytebier B. et al., P. N. A. S. (USA), 84: 5345- 5349. 1988 Klein và cs tái sinh cây chuyển gen ổn định thông qua phương pháp bắn gen. Klein T. M. et al., P. N. A. S. (USA), 85: 4305-4309. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 12 1991 Sản xuất cây mang gen đầu tiên ở thông Larix decidua bằng chuyển gen qua Agrobacterium rhizogenes. Huang Y. et al., In vitro Cell Dev. Biol., 27: 201- 207. 1992 Lúa kháng chất diệt cỏ nhờ chuyển gen vào tế bào trần thông qua PEG. Dutta S. K. et al., Plant Mol. Biol., 20: 619-629. 1993 Kranz và Lorz thực hiện thụ tinh in vitro tạo ra và nuôi cấy phôi hợp tử ở ngô. Các quá trình phát triển và phân hoá của phôi sau đó đã được quan sát dưới kính hiển vi và phân tích biểu hiện của gen nhằm xác định các gen tham gia trong từng giai đoạn phát triển của phôi. Kranz E. and Lorz H., The Plant Cell, 5: 739- 746. 1994 Thương mại hoá giống cà chua chuyển gen 'Flavr-Savr' 1998 Hamilton và cs đã phát triển vector mang NST nhân tạo của hai vi khuẩn (BBIC) cho chuyển gen thông qua Agrobacterium (khả năng chuyển 150 kb). Hamilton C. M. et al., P. N. A. S. (USA), 93: 9975-9979 1.3 Sơ lược các kỹ thuật dùng trong nuôi cấy mô 1.3.1. Nuôi cấy phôi. Sự ghi nhận đầu tiên về nuôi cấy phôi là công trình của Charles Bonnet ở thế kỷ XVIII. Ông tách phôi Phascolus và Fagopyrum trong trong đất và nhận được cây nhưng là cây lùn. Từ đầu thế kỷ XX các công trình nuôi cấy phôi dần được hoàn thiện hơn. Từ các công trình nghiên cứu trước đó, Knudson (1922) đã nuôi cấy thành công phôi cây lan trong môi trường chứa đường và khám phá ra một điều là nếu thiếu đường thì phôi không thể phát triển thành protocom. Raghavan ( 1976, 7980) đã công bố rằng phôi phát triển qua hai giai đoạn dị dưỡng và tự dưỡng. Ở giai đoạn dị dưỡng ( tiền phôi) cần có các chất điều hoà sinh trưởng để phát triển. Trong giai đoạn tự dưỡng sự phát triển của phôi không cần chất điều hoà sinh trưởng. Đối với nuôi cấy phôi, như đã biết đường đóng vai trò rất quan trọng. Trong nhiều trường hợp thì đường sucrose cho kết qủa tốt hơn các đường khác. Ngoài ra một số chất tự nhiên như nước dừa, nước chiết malt, casein thuỷ phân, là những chất rất cần trong nuôi cấy phôi. Các chất kích thích sinh trưởng như GA3, auxin, cytokinine thường được Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 13 dùng nhiều trong nuôi cấy phôi. Auxin thường dùng ở nồng độ thấp. Kinetin có vai trò đặc biệt cho sự phát triển của phôi. Các yếu tố ngoại cảnh như nhiệt độ, ánh sáng cũng ảnh hưởng đến sự phát triển của phôi nuôi cấy in vitro. Thường phôi nuôi cấy cần nhiệt độ và ánh sáng thấp hơn phôi phát triển tự nhiên. 1.3.2. Nuôi cấy mô và cơ quan tách rời Wetmore (1946) nuôi cấy đỉnh chồi cây nho dại, cùng với một số tác giả khác, ông đã chứng minh các bộ phận của cây đều có thể nuôi cấy khi gặp điều kiện thuận lợi. Lon và Ball (1946) với thí nghiệm nuôi cấy đỉnh chồi cây măng tây đã cho thấy khi nuôi các bộ phận của cây như lá, thân, hoa thì khả năng tạo mô sẹo nhiều hơn. Nhu cầu dinh dưỡng khi nuôi cấy các bộ phận khác nhau của cây là khác nhau nhưng có thể thấy một số yêu cầu chung như nguồn cacbon dưới dạng đường và các muối của các nguyên tố đa lượng ( nito, phospho, kali, calxi) và vi lượng ( Mg, Fe, Mn, Co,Zn,...). Ngoài ra cần một số chất đặc biệt như vitamin (B1, B6, B3, ...) và các chất điều hoà sinh trưởng. Muốn duy trì sinh trưởng và phát triển của cơ quan nuôi cấy cần thường xuyên cấy chuyền qua môi trường mới. Đối với nuôi cấy mô, ngoài những thành phần dinh dưỡng như đối với nuôi cấy cơ quan tách rời, cần bổ sung thêm các chất hữu cơ chứa ít nitơ dưới dạng acide amine, đường và inositol. Trong trường hợp nuôi cấy mô, các chất điều hoà sinh trưởng có vai trò quan trọng hơn vì các mô tách rời không có khử năng tổng hợp các chất này. 1.3.3. Nuôi cấy mô phân sinh Mô phân sinh thường là các mô đỉnh chồi và cành có kích thước 0,1mm÷ 1cm. Các mô phân sinh dùng để nuôi cấy thường tách từ các mầm non, các chồi mới hình thành hoặc các cành non. Đối với nuôi cấy mô phân sinh sự cân bằng giữa các chất điều hoà sinh trưởng rất quan trọng. Muốn kích thích tạo chồi cần bổ sung cytokinine hoặc tổ hợp cytokinine với auxin. Muốn tạo rễ thì bổ sung các auxin như NAA, IAA,... Nuôi cấy mô phân sinh được sử dụng để loại virus tạo cây sạch virus và nhân giống in vitro. Nuôi cấy mô phân sinh còn được sử dụng để nghiên cứu quá trình hình thành cơ quan, tạo cây đa bội qua xử lý colchicin. 1.3.4. Nuôi cấy bao phấn Kỹ thuật nuôi cấy bao phấn đã phát triển và hoàn thiện nhờ công trình nghiên cứu của Bourgin và Nitsch (1967) trên cây thuốc lá, Niizeki và Oono (1968) trên lúa.Từ cuối Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 14 những năm 1970 đã nhận được cây đơn bội từ nuôi cấy bao phấn trên 30 loại cây. Kết quả nghiên cứu của nhiều tác giả cho thấy hạt phấn nuôi cấy có thể phát triển thành cây đơn bội hoàn chỉnh trong điều kiện nuôi cấy in vitro bằng con đường tạo phôi trực tiếp hoặc gián tiếp thông qua tạo mô sẹo và tạo cơ quan. Hình 1.1 Một số kỹ thuật dùng trong nuôi cấy mô tế bào thực vật A. Mô sẹo từ Catharanthus roseus. (B)Nuôi cấy dịch tế bào từ Coryphanta spp. (C) Nốt sần C. roseus. (D) Đầu rễ từ C. roseus. (E)Tái sinh cây từ C. roseus callus. (F) Protoplasts từ Coffea arabica (G) Vi nhân giống của Agave tequilana. (H) Phôi vô tính của cây Coffea canephora. (I) Nuôi cấy rễ cây Psacalium decompositum. 1.3.5. Nuôi cấy tế bào đơn Ngoài khả năng nuôi cấy các cơ quan và mô thực vật, tế bào thực vật có thể được tách và nuôi riêng rẽ trong môi trường phù hợp. Những công trình về nuôi cấy tế bào đơn được tiến hành từ những năm 50 của thế kỷ XX. Tế bào đơn có thể nhận được bằng con đường nghiền mô, hoặc xử lý enzym. Mỗi lọai cây, mỗi loại tế bào khác nhau đòi hỏi những kỹ thuật nuôi cấy khác nhau. Nuôi cấy tế bào đơn được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc tế bào, nghiên cứu ảnh hưởng của các điều kiện khác nhau lên các quá trình sinh trưởng, phát triển và phân hoá của tế bào. Nuôi cấy tế bào đơn còn được sử dụng trong chọn dòng tế bào. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
- 15 1.3.6. Nuôi cấy protoplast Nuôi cấy protoplats được phát triển nhờ công trình của Cocking (1960). Ông là người đầu tiên dùng enzym để thuỷ phân thành tế bào và tách được protoplast từ tế bào rễ cà chua. Trong điều kiện nuôi cấy phù hợp protoplast có thể tái sinh thành tế bào mới, phân chia và tái sinh thành cây hoàn chỉnh. Do không có thành tế bào nên protoplast trở nên một đối tượng lý tưởng trong nghiên cứu biến đổi di truyền ở thực vật. Bằng phương pháp dung hợp hai protoplast có thể tạo ra các cây lai soma. Ngoài ra còn có thể sử dụng kỹ thuật dung hợp protoplast để chuyển các bào quan và chuyển gene. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật http://www.ebook.edu.vn
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD
-
Nuôi cấy tế bào thực vật
32 p |
1279 |
442
-
Chủ đề: Nuôi cấy Mô - Tế bào thực vật bằng tế bào Trần và kỹ thuật chuyển Gen
70 p |
956 |
393
-
Giáo trình: Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vât
357 p |
748 |
371
-
NUÔI CẤY MÔ – TẾ BÀO THỰC VẬT
12 p |
1041 |
285
-
Tiểu luận: Nuôi cấy mô, tế bào thực vật
22 p |
549 |
230
-
Nuôi cấy mô tế bào thực vật học -Nghiên cứu và ứng dụng
186 p |
323 |
138
-
Đề cương nuôi cấy mô tế bào
20 p |
256 |
114
-
Báo cáo: Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật
28 p |
257 |
112
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 6
28 p |
206 |
112
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 3
28 p |
215 |
111
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 2
9 p |
234 |
109
-
Giáo trình Nuôi cấy mô tế bào thực vật
356 p |
146 |
99
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 8
16 p |
136 |
82
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Chương 7
25 p |
163 |
79
-
Giáo trình CN nuôi cấy mô tế bào thực vật - Phần 2 chương 1
10 p |
85 |
46
-
qqqBài giảng: Nuôi cấy mô - Tế bào thực vật bằng tế bào trần và kỹ thuật chuyển gen
70 p |
76 |
33
-
Đề tài: Nuôi cấy mô và tế bào thực vật
19 p |
2 |
0


text:
Truyền thông giữa nhà quản lý và ban lãnh đạo
Chia sẻ: Haithanh Haithanh | Ngày: | Loại File: DOC | Số trang:2
134
lượt xem 49
download
lượt xem 49
download
Truyền thông giữa nhà quản lý và ban lãnh đạo
Mô tả tài liệu
Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ
Có rất nhiều nguyên nhân dẫn tới sự thất bại trong việc giao tiếp của lãnh đạo. Nếu như việc truyền thông giữa lãnh đạo và nhà quản lý gặp trục trặc, hậu quả thật là tai hại. Để tránh các hậu quả không đáng có đó, bạn có thể tham khảo mười lời khuyên dưới đây:
Chủ đề:
Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

markdown:
# Truyền thông giữa nhà quản lý và ban lãnh đạo
Chia sẻ: Haithanh Haithanh | Ngày: | Loại File: DOC | Số trang:2
![](images/blank.gif)
![](images/blank.gif)
134
lượt xem 49
download
lượt xem 49
download
![](http://image1.tailieu.vn/document/thumbnail/2009/20090305/haithanh/80x100/2147_truyen_thong_giua_nha_qua.jpg)
##
Truyền thông giữa nhà quản lý và ban lãnh đạo
Mô tả tài liệu
[Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ](javascript:void(0);)
Download
![](images/down16x21.png)
Có rất nhiều nguyên nhân dẫn tới sự thất bại trong việc giao tiếp của lãnh đạo. Nếu như việc truyền thông giữa lãnh đạo và nhà quản lý gặp trục trặc, hậu quả thật là tai hại. Để tránh các hậu quả không đáng có đó, bạn có thể tham khảo mười lời khuyên dưới đây:
Chủ đề:
![](images/graphics/blank.gif)
Bình luận(0)
[Đăng nhập để gửi bình luận!](javascript:void(0);)
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD


text:
Đăng ký
|
Đăng nhập
|
Download
Driver
Đăng nhập
Tên đăng nhập
Mật khẩu
Sản phẩm
Sản phẩm
Số lượng
0
0
Trang chủ
Giới thiệu
Sản phẩm
Quần Áo Thể Thao GYM, AEROBIC
GIÀY
BA LÔ... PHỤ KIỆN
BÓNG ĐÁ
ÁO KHOÁC
MŨ
T-shirt ( Áo Thun )
Skate Board(Ván Trượt)
MÁY TẬP THỂ DỤC
TECHDESK( Điều khiển bằng ngón tay)
BÓNG RỔ
PATIN
ÁO THUN
Dịch vụ
Tin tức
Công nghệ mới
Điện tử viễn thông
Công nghệ thông tin
Thời trang
Chính sách bảo hành
Khuyến mãi
Hướng dẫn mua hàng
Liên hệ
Danh mục
Quần Áo Thể Thao GYM, AEROBIC
Quần Áo Thể Thao Nữ
Quần Áo Thể Thao Nam
GIÀY
Giày Bóng Đá Sân Cỏ Nhân Tạo
Giày Tập Gym Nike
Sandal
Giày AVIA Thượng Đình
Dép
Giày thời trang
Giày Bóng Rổ
BA LÔ... PHỤ KIỆN
BÓNG ĐÁ
ÁO BÓNG ĐÁ CLB 2015 2016
ÁO BÓNG ĐÁ CLB 2014-2015
ÁO WORLD CUP 2014
Áo Bóng Đá
Áo bóng đá hàng Thái Lan
Tất Bóng Đá
Bộ bóng đá trẻ em
Phụ kiện bóng đá
Bộ bóng đá không logo
Dịch vụ in tên và số đẹp
Mũ Câu Lạc Bộ
Áo khoác câu lạc bộ
Áo lót bóng đá
ÁO KHOÁC
Áo khoác nữ
Áo khoác nam
MŨ
Mũ thể thao
Mũ Hiphop
T-shirt ( Áo Thun )
Skate Board(Ván Trượt)
Skate board(Nguyên Bộ)
Grip
Wheel
Trucks
Deck
MÁY TẬP THỂ DỤC
TECHDESK( Điều khiển bằng ngón tay)
Techdesk( Trò chơi điều khiển bằng ngón tay)
BÓNG RỔ
Áo thun bóng rổ
Phụ kiện bóng rổ
Quần bóng rổ
Áo Khoác bóng rỗ
Áo thi đấu NBA
PATIN
Patin
ÁO THUN
Áo thun nữ
ÁO SÁT NÁCH
Aó Body
Aó Vans
Aó Timberland
Aó thun Gunit
Áo Thun Ecko
Tin tức
http://backlink.internet-adsl.vn
http://www.backlinks.vn/
http://www.backlink.com.vn
http://10h.vn/free-backlink.html
Sản phẩm khuyến mãi
Đang cập nhật
Hỗ trợ trực tuyến
Hãy gọi cho chúng tôi khi bạn cần hỗ trợ !
(08) 2468 357
(08) 357 2348
Đăng ký nhận tin
Hãy đăng ký để nhận được thông tin khuyến mãi từ cửa hàng
Trang chủ
Sản phẩm
Áo thun bóng rổ
Thông tin chi tiết
Áo Celtic
Mã sản phẩm :
aothunceltic
Giá bán:
180,000 VNĐ
Thông tin khuyến mãi:
Bảo hành :
Đang cập nhật
Mô tả
Hình ảnh
Thông tin sản phẩm :
Xuất xứ (quốc gia):
Viet Nam
Nhà sản xuất:
Cập nhật
Email phản hồi:
Tâm Sports
Địa chỉ: 51A24 Hà Giang, Phường 1, Thành phố Bảo Lộc
Điện thoại: 0902152256( gặp Tuấn) hoặc 063.3731666 - Fax:
Trực tuyến: 9
Tổng lượt: 3066284
Copyright @ 2011. All Right Reserve. Designed by
Digicom

X-Powered-By: UrlRewriter.NET 2.0.0

X-Powered-By-Plesk: PleskWin