हेपेटाइटिस बी वायरस के संक्रमण का पता लगाने के लिए परीक्षण, जिसे परख कहा जाता है में सेरम या रक्त परीक्षा शामिल होता है जो या तो वायरल एंटिजेन (वायरस के द्वारा उत्पादित प्रोटीन) या फिर मेजबान के द्वारा उत्पादित एंटिबोडीज की पहचान करता है। इन परखों की व्याख्या जटिल है।

हेपेटाइटिस बी सतह एंटिजेन ("HBsAg") का इस संक्रमण की उपस्थिति के लिए अक्सर बार-बार इस्तेमाल किया जाता है। यह पहला पहचाने जाने लायक वायरल एंटिजेन है जो संक्रमण के दौरान प्रकट होता है। हालांकि, एक संक्रमण के शुरू में, यह एंटिजेन उपस्थित नहीं भी रह सकता है और बाद में यह अनपहचाना भी रह सकता है क्योंकि यह मेजबान द्वारा साफ किया जाता रहता है। संक्रामक विरिअन में वायरल जिनॉम को संलग्न करते हुए एक भीतरी "कोर कण" भी होता है। आइसाहेड्रल कोर कण 180 या 240 प्रति कोर प्रोटीन से बना होता है, जो वैकल्पिक रूप से हेपेटाइटिस बी कोर एंटिजेन "HBcAg" के रूप में ज्ञात है। इसी 'विंडो' के दौरान जिसमें मेजबान संक्रमित रहते हैं लेकिन सफलतापूर्वक वायस को साफ करते हैं, हैपेटाइटिस बी कोर एंटिजेन ("एंटी-HBc IgM") के लिए IgM एंटीबॉडी रोग के एकमात्र सेरोलॉजिकल प्रमाण हो सकते हैं। 

"HBeAg" के प्रकट होने के तुरंत बाद हैपेटाइटिस B e ("HBeAg") नामक एक और एंटिजेन प्रकट हो जाएगा. परंपरागत रूप से, मेजबान के सीरम में HBeAg की उपस्थिति वायरल प्रतिकृति के अधिक उच्च दरों से युक्त होता है और प्रभावहीनता को बढ़ा देता है; तथापि, हेपेटाइटिस बी वायरस के वेरिएंट 'ई' एंटिजेन का उत्पादन नहीं करते इसलिए यह नियम हमेशा सच नहीं होता है। संक्रमण के प्राकृतिक कोर्स के दौरान, HBeAg को साफ किया जा सकता है और 'ई' एंटीजेन के एंटीबॉडी ("एंटी-HBe") तुरंत बाद पैदा होते हैं। यह रूपांतरण आमतौर पर वायरल प्रतिकृति में नाटकीय गिरावट के साथ जुड़ा हैं। 

अगर मेजबान संक्रमण को साफ करने में सक्षम है, तो आखिरकार HBsAg अनपहचाननीय हो जाएगा और इसके बाद हेपेटाइटिस बी सतह के IgG एंटीबॉडी और कोर एंटीजेन ("एंटी-HBs" और" एंटी HBc IgG") पैदा होंगे. HBsAg को हटाने और एंटी-HBS के प्रकट होने के बीच के समय को विंडो अवधि कहा जाता है। HBsAg के लिए नकारात्मक एवं एंटी-HBc के लिए सकारात्मक व्यक्ति या तो संक्रमण को खत्म कर चुका होता है या उसे पहले से टीका लगाया गया होता है। 

ऐसे व्यक्ति, जो कम से कम छह महीने के लिए HBsAg सकारात्मक में रहते हैं उन्हें हेपेटाइटिस बी के वाहक के रूप में माना जाता है। वायरस के वाहकों को क्रोनिक हेपेटाइटिस बी हो सकता है जो उन्नत सीरम एलनाइन एमिनोट्रांस्फरेज स्तर और लीवर के सूजन द्वारा परिलक्षित होगा, जैसा कि बायोप्सी से पता चलता है। वाहक जो नकारात्मक HBeAg संक्रमण की स्थिति में सेरोकनवर्टेड हो चुके होते है, विशेष रूप से वे जिन्होंने व्यस्क के रूप में संक्रमण का अभिग्रहण कर लिया है, उनमें बहुत कम वायरल बहुलीकरण होता है और इस प्रकार उनमें लंबी-अवधि की जटिलता या दुसरों में संक्रमण के संचरण करने का खतरा कम रहता है।

पीसीआर परीक्षण को एचबीवी डीएनए की पहचान और माप के लिए विकसित किया गया है जिसे चिकित्सकीय नमूने में वायरल लोड कहा जाता है। इन परीक्षणों का उपयोग व्यक्ति की संक्रमण अवस्था के मूल्यांकन और उपचार की निगरानी के लिए किया जाता है। उच्च वायरल लोड वाले व्यक्तियों के पास, खास अंदाज में बायोप्सी पर ग्राउण्ड ग्लास हेपैटोसाइट्स होता है। 

पुनर्सक्रियन
जीनोम
निदान
प्रतिकृति