विभेदन यह क्रिया है जिससे रेसिमिक रूपांतरण से उसके दोनों प्रतिबिंब रूप अलग किए जाते हैं। वास्तव में इनका मात्रात्मक पृथक्करण बहुत ही कम होता है और कुछ में तो केवल एक ही प्रतिरूप की प्राप्ति होती है। विभेदन की कुछ विधियाँ इस प्रकार हैं :

(1) यांत्रिक पृथक्करण (Mechanical separation) - पैस्टर ने उस विधि का पता लगाया जिसके अनुसार दोनों प्रतिरूपों के क्रिस्टल अलग अलग होते हैं और वे हाथों से अलग किए जा सकते हैं। पैस्टर ने सोडियम अमोनियम टार्टरेट को 28 डिग्री सें. पर क्रिस्टलीकृत कर, दोनों प्रकार के क्रिस्टलों को चिमटे से अलग अलग किया था। इस विधि का उपयोग बड़ा सीमित है।

(2) निवेशन द्वारा वर्णात्मक क्रिस्टलन (Preferential crystallisation by inoculation) - रेसिमिक मिश्रण के अतिसंतृप्त विलयन में जब एक प्रतिबिंब रूप का एक क्रिस्टल डाला जाता है, तो पहले उसी प्रतिबिंब रूप का क्रिस्टल होता है और इस प्रकार उस रूप का पृथक्करण हो सकता है।

(3) जीवरासायनिक विभेदन (Biochemical resolution) - कुछ जीवाणु या फफूँद जब किसी रेसिमिक के तनु विलयन पर उगाए जाते हैं, तब ये एक प्रतिबिंब रूप को दूसरे की अपेक्षा शीघ्रता से नष्ट करते हैं। इस प्रकार किसी निर्दिष्ट समय के उपरांत एक प्रतिबिंब रूप की प्राप्ति हो सकती है। पेनिसीलियम ग्लौकम जब रेसिमिक अमोनियम टार्टरेट के विलयन पर उगाया जाता है, तो पहले डेक्ट्रो रूप नष्ट हो जाता है और लीवो बच जाता है।

(4) रासायनिक विभेदन - यह विधि सबसे उत्तम है। इसमें रेसिमिक यौगिक के प्रतिबिंब रूपों को किसी प्रकाशत: सक्रिय यौगिक से उपचारित करते हैं, ताकि वे परस्पर मिलकर ऐसे यौगिक बनें जिनका पृथक्करण सरलता से किया जा सके। रेसिमिक अम्लों को प्रकाशत: सक्रिय (+) क्षारक के साथ उपचारित करने से जो लवण बनेंगे, उनमें कुछ लवण +अम्ल तथा +क्षारक के होंगे और कुछ लवण - अम्ल तथा +क्षारक के होंगे। इनके गुणों में विभिन्नता रह सकती है, जिनसे वे क्रिस्टलन द्वारा पृथक् किए जा सकते हैं।

(5) वरणात्मक अवशोषण (Selective absorption) - प्रकाशत: सक्रिय पदार्थों का वरणात्मक अवशोषण किसी विशेष प्रकाशत: सक्रिय अवशोषक द्वारा हो सकता है। अनेक रसायनज्ञों ने इसके द्वारा विभेदन संपन्न किया है।

रेसिमिक रूपों का विभेदन (Resemic Resolution)
एक असममित कार्बन परमाणुवाले यौगिक
प्रतिबिंब रूपों के गुण
चतुष्फलकीय कार्बन की पुष्टि