तीसरी पीढ़ी के सिफालोस्पोरिन में क्रियाशीलता संबंधी एक व्यापक विस्तृत-श्रेणी एवं ग्राम-निगेटिव सूक्ष्मजीवों के विरुद्ध अधिक बढ़ी हुई क्रियाशीलता होती है। इस समूह के कुछ सदस्यों (विशेष रूप से वे जो मौखिक सूत्रण में उपलब्ध रहते हैं और वे जिनमें गतिशील ग्राम-निगेटिव वातापेक्षी दण्डाणु संबंधी क्रियाशीलता होती है) में ग्राम-पॉजिटिव सूक्ष्मजीवों के विरुद्ध घटी क्रियाशीलता होती है। वे विशेष रूप से अस्पताल से होने वाले संक्रमणों के उपचार में उपयोगी हो सकते हैं, हालांकि प्रसारित-विस्तृत श्रेणी वाले बीटा-लैक्टामेस के बढ़ते हुए स्तर प्रतिजैविकों के इस वर्ग की नैदानिक उपयोगिता को कम कर रहे हैं। वे सीएनएस (CNS) में प्रवेश करने में भी सक्षम होते हैं, जिसके द्वारा वे उन्हें न्यूमोकोक्की, मेनिंगोकोक्की द्वारा उत्पन्न किए गए 
मस्तिष्कावरणशोथ, "एच. इंफ्लुएंज़ा", एवं अतिसंवेदनशील "ई.कोली", "क्लेब्सिएला", एवं पेनिसिलिन-प्रतिरोधी "एन. गोनॉरिया" (सूजाक) के विरुद्ध उपयोगी बनाते हैं। 2007 से, तीसरी पीढ़ी के सिफालोस्पोरिन (सेफ़्ट्राइऐक्सोन या सेफ़िक्सिम) संयुक्त राज्य अमेरिका में सूजाक के लिए एक मात्र परामर्श योग्य उपचार रहे हैं।


गतिशील ग्राम-निगेटिव वातापेक्षी दण्डाणु संबंधी क्रियाशीलता वाले तृतीय पीढ़ी के सिफालोस्पोरिन

निम्नलिखित सेफेम को भी कभी-कभी तृतीय-पीढ़ी के सिफालोस्पोरिन के साथ समूहीकृत किया जाता है:

वर्गीकरण
तीसरी पीढ़ी
नैदानिक उपयोग
प्रतिकूल प्रभाव