enfermedades infecciosas
Métodos de identificación de las enfermedades infecciosas basados en ácidos nucleicos
Amplificación de ácidos nucleicos
Las técnicas de amplificación de los ácidos nucleicos emplean cantidades muy pequeñas de DNA o RNA y las replican muchas veces, lo que permite entonces detectar microorganismos en cantidad de trazas en una muestra y evita la necesidad de realizar un cultivo. Estas técnicas son especialmente útiles para microorganismos que son difíciles de cultivar o de identificar con otros métodos (p. ej., virus, patógenos intracelulares obligados, hongos, micobacterias, algunas otras bacterias) o que están presentes en pequeña cantidad. Estas pruebas pueden implicar Amplificación del objetivo (p. ej., PCR, transcriptasa inversa-PCR [RT-PCR], amplificación por desplazamiento de cadena, amplificación de la transcripción) Amplificación de la señal (p. ej., análisis de DNA ramificados, captura híbrida) Amplificación de la sonda (p. ej., reacción en cadena de la ligasa, cleavasa-invader, sondas que ciclan) Análisis posamplificación (p. ej., secuencia del producto amplificado, análisis de micromatrices y análisis de la curva de fusión, como se hace en la PCR en tiempo real) Son muy importantes la obtención adecuada de la muestra y su almacenamiento antes de llegar al laboratorio de diagnóstico molecular. Dado que los métodos de amplificación son tan sensibles, pueden producirse fácilmente resultados falsos positivos debido a contaminantes en trazas de la muestra o de los equipos. A pesar de esta elevada sensibilidad, a veces se producen resultados falsos negativos, incluso cuando el paciente es sintomático (p. ej., en la Virus del Nilo occidental ). Los resultados falsos negativos pueden minimizarse tomando las siguientes medidas: Evitar el uso de hisopos con mangos de madera o puntas de algodón (debe usarse el hisopo que se ha validado para el ensayo de amplificación) Transportar las muestras rápidamente Congelar o refrigerar las muestras si su transporte tomará>2 h La congelación es el método de almacenamiento típico de las muestras para ensayos de amplificación de los ácidos nucleicos. Sin embargo, debe preferirse la refrigeración en lugar de la congelación si se sospecha la presencia de virus lábiles (p. ej., varicela-zóster, influenza o HIV-2) o si además van a realizarse cultivos virales (las muestras congeladas pueden no ser útiles para los cultivos estandarizados). 