Der optische Aufbau der Festbrennweite besteht aus 17 Linsen, die in 13 Gruppen angeordnet sind.
Wie bereits das RF 85 mm F2 Macro IS STM kann auch das Canon RF 100 mm F2.8 L Macro IS USM als Makro- und Porträtobjektiv gebraucht werden. Der Fokus liegt allerdings auf der Makrofotografie. Der optische Aufbau der Festbrennweite besteht aus 17 Linsen, die in 13 Gruppen angeordnet sind. Der schnellen Autofokus sowie die sehr gute optische Abbildungsqualität, machen das Objektiv zum must have für Canon-RF-Fotografen.