본 연구는 인간피부유사모델(human skin equivalent model, HSEM)을 사용하여 멜라닌 합성저해제로 알려진 PF3758309 의 피부 자극성을 동물대체시험법의 일환으로 평가하고자 하였다. 인체피부유사체는 콜라겐으로 코팅된 matrix insert 위에 인간에서 분리한 각질세포(human epidermal keratinocyte, HEK)를 성장 배지와 함께 배양시켜 제작하였다. 제작된 인간피부 유사모델을 사용하여 PF3758309의 피부 자극성(irritation)에 대해서 평가하고자, 해당 물질을 HSEM의 각질 표면 위에 처리한 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)를 통하여 세포생존율을 측정하였다. 세포생존율이 50% 이하일 경우 자극성이 존재하며, 50% 이상일 경우 비자극성으로 판단할 수 있다. 또한, HSEM을 이용하여 PF3758309의 피부 부식성(corrosion) 및 멜라닌 합성 저해능을 검증하였다. 제작된 HSEM의 integrity는 epidermal differentiation markers인 Keratin 5, Keratin 1, Involucrin의 발현을 면역조직화학염색법으로 검증하였다. HSEM에 PF3758309를 15 min 동안 처리 후, in vitro irritation assay를 진행한 결과, PF3758309의 처리 농도가 0.2, 0.5, 1.0 mg 일 때, 세포생존율은 각각 83.6%, 78.8%, 77.8% 로 나타났으며, 양성대조군인 5% sodium dodecyl sulfate을 처리시 세포생존율 2.8%를 나타내었다. 또한, in vitro corrosion assay 를 진행한 결과, PF3758309의 처리 농도가 0.2, 0.5, 1.0 mg 일 때, 세포생존율은 각각 95.3%, 95.0%, 94.2%로 나타났다. 뿐만 아니라, Fontana-Masson 염색법을 활용하여 PF3758309가 처리된 HSEM의 멜라닌 수준은 대조군 대비 현저하게 감소됨을 보였다. 멜라닌 합성 저해제로 알려진 PF3758309는 피부자극성이 없음을 본 실험을 통해 나타내었다.
인간피부유사모델을 활용하여 멜라닌 합성저해제로 알려진 PF3758309의 피부 자극성을 동물대체시험법의 일환으로 평가하였다. 인체피부유사체는 콜라겐으로 코팅된 matrix insert 위에 인간에서 분리한 각질세포를 성장 배지와 함께 배양시켜 제작했다. 제작된 인간피부 유사모델을 사용하여 PF3758309의 피부 자극성에 대하여 평가하였다. 세포생존율이 50% 이하일 경우 자극성이 존재하였고 50% 이상일 경우 비자극성으로 판단되었다.